日本乙型脑炎病毒GⅢ型标准品质粒的构建

发布时间：2022-11-06 10:21

　　目的构建检测日本乙型脑炎病毒（JEV） GⅢ型拷贝数的质粒标准品,利用该质粒标准品定量检测病毒的拷贝数。方法通过设计引物经反转录聚合酶链反应扩增JEV相对保守区序列（prM结构蛋白）,得到的目的片段克隆连接到pMD19-T载体上,从而获得JEV质粒标准品。随后,通过实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）得到质粒标准品的标准曲线方程以及对JEV患者血清中病毒拷贝数进行检测。结果构建的JEV质粒标准品的RT-qPCR结果显示:相同浓度复孔间Ct值差异小（＜0.5）,熔解曲线峰值单一。得到的标准曲线方程为y=-0.288 9x+11.516,R~2=0.993,乙脑患者血清样品原液及倍比稀释度的病毒拷贝数分别为1 184 130.27、120 912.86、10 736.84、1 053.45、121.25 copies/μL。结论本研究成功构建了检测JEV的质粒标准品,通过RT-qPCR发现其具有稳定性好、灵敏度高等优点,可应用于JEV拷贝数的定量检测。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株、载体
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 JEV在适应株上的培养
    1.4 标准品质粒的构建
    1.5 标准质粒体系的建立
    1.6 JE患者血清中病毒拷贝数定量检测
2 结果
    2.1 JEV pr M区域片段的获得
    2.2 JEV标准品的鉴定
    2.3 标准曲线的绘制及JE患者血清中拷贝数的测定
    2.4 JE患者血清原液及倍比稀释的样品拷贝数
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Mechanism of Japanese encephalitis virus genotypes replacement based on human,porcine and mosquito-originated cell lines model[J]. Loan Phuong Do,Trang Minh Bui,Nga Thi Phan.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(04)



本文编号：3703330