Wnt/β-catenin信号通路在BMSCs向神经样细胞分化中的作用

发布时间：2023-01-05 19:14

　　目的：探讨应用EGF、bFGF诱导BMSCs向神经样细胞分化的可行性，并进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在BMSCs向神经样细胞分化中的作用。 方法：取4周龄大健康清洁级SD大鼠骨髓,采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,流式细胞仪检测P3代细胞表面的骨髓基质标志CD90和造血细胞标志CD45。取P3代细胞，根据诱导条件不同分为4组：空白对照组（1%胎牛血清+DMEM/F-12）、EGF组（20ng/mlEGF+1%胎牛血清+DMEM/F-12）、bFGF组（20ng/mlbFGF+1%胎牛血清+DMEM/F-12）、EGF+bFGF组（20ng/mlEGF+20ng/mlbFGF+1%胎牛血清+DMEM/F-12），倒置相差显微镜观察细胞形态变化，诱导7天后，采用免疫细胞化学法和Western blot检测神经细胞标志蛋白NSE、GFAP的表达，RT-PCR检测NSE、GFAP、nestin、β-catenin、BDNF、GDNF基因mRNA的变化。 结果：P3代BMSCs大致呈单一的长梭形或扁平形，紧密漩涡样排列生长，流式细胞仪示CD90表达高达98.95%，... 

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 器材的准备
        2.2.2 BMSCs 的分离、培养
        2.2.3 流式细胞仪鉴定 BMSCs
        2.2.4 诱导分化分组
        2.2.5 细胞形态学观察
        2.2.6 免疫细胞染色检测 NSE、GFAP 神经标志蛋白
        2.2.7 Western blot 检测 NSE、GFAP 蛋白表达水平
        2.2.8 RT-PCR 检测相关 mRNA 表达水平
    2.3 统计学处理
第3章 结果
    3.1 细胞形态观察与鉴定
        3.1.1 BMSCs 形态观察
        3.1.2 BMSCs 鉴定
    3.2 BMSCs 神经分化及神经标志的免疫细胞染色
    3.3 Western blot 检测
    3.4 RT-PCR 检测结果
第4章 讨论
    4.1 BMSCs 概述
        4.1.1 BMSCs 的分离与鉴定
        4.1.2 微环境对 BMSCs 的影响
    4.2 EGF、bFGF 诱导 BMSCs 成神经分化
    4.3 不同血清浓度对 BMSCs 成神经分化的影响
    4.4 Wnt/β-catenin 信号通路在 BMSCs 成神经分化中的作用
第5章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]不同血清浓度对bFGF联合EGF诱导BMSCs向神经细胞分化的影响[J]. 何丁文,殷嫦嫦,殷明,罗元一,刘玉亮,梁广胜.  神经解剖学杂志. 2013(01)
[2]不同胎牛血清、培养瓶体外培养大鼠骨髓间充质干细胞效果比较[J]. 何丁文,邬亚华,殷明,魏强强,殷嫦嫦.  山东医药. 2012(38)
[3]多种细胞因子诱导大鼠间充质干细胞向多巴胺能神经元分化[J]. 陈丹丹,付文玉,庄文欣,吕娥,郭健,李锋杰.  解剖学杂志. 2011 (05)
[4]大鼠骨髓间充质干细胞体外向肠神经细胞分化及胶质细胞源神经营养因子表达的变化[J]. 吴晓娟,魏明发,柴成伟,冯杰雄,黎润光,王小林.  中华小儿外科杂志. 2010 (08)
[5]大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖与多向分化的能力[J]. 许永涛,李锋,鲁厚庚.  中国组织工程研究与临床康复. 2010(23)
[6]胶质细胞源神经营养因子在大鼠骨髓间充质干细胞神经分化中的表达[J]. 吴晓娟,魏明发,柴成伟,高贺云,黎润光,冯杰雄,邓科.  实用儿科临床杂志. 2009(23)
[7]成体骨髓间充质干细胞生物学特性及在组织工程和再生医学中的作用[J]. 杜振宗,王海龙,宋剑非,郑民,李牧.  中国组织工程研究与临床康复. 2009(33)
[8]不同分离及培养方法对大鼠骨髓间充质干细胞生长增殖和生物学特性的影响[J]. 贾贵清,张明鸣,杨平,程惊秋,陆燕蓉,伍晓汀.  四川大学学报(医学版). 2009(04)
[9]胎牛血清对胎鼠神经干细胞分化的影响[J]. 唐少锋,刘承杏.  昆明医学院学报. 2009(05)
[10]建立大鼠骨髓间充质干细胞稳定分离培养体系与鉴定[J]. 杨丽,张荣华,谢厚杰,蔡宇,黄丰.  中国组织工程研究与临床康复. 2009(06)

博士论文
[1]骨髓间充质干细胞结合多肽自组装支架材料治疗脊髓损伤的实验研究[D]. 李长文.华中科技大学 2009



本文编号：3728004