健脾补肾方对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）小鼠血清IL-4及TGF-β的影响

发布时间：2017-05-18 07:20

  本文关键词：健脾补肾方对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）小鼠血清IL-4及TGF-β的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察健脾补肾方对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠的肌无力症状改善及发病过程中血清白介素-4(IL-4)和转化生长因子-β(TGF-β)的变化,探讨重症肌无力(MG)发病过程中的免疫学机制,为寻求中医药治疗重症肌无力提供有意义的基础实验依据。方法:将60只8-10周龄的健康SPF级C57BL/6雌性小鼠随机分为两组:正常对照组(10只)、模型组(50只)。模型组小鼠以人工合成的鼠源性乙酰胆碱受体a亚基97-116肽段作为免疫原建立EAMG模型。初次免疫以每只小鼠双肩部及双后足垫皮下注射含鼠源乙酰胆碱受体a亚基97-116肽段50μg的抗原乳剂200μL,其中每个部位注射50μL,初次免疫后第30天、50天时模型组小鼠仍以相同部位及剂量再次加强免疫。正常对照组给予皮下注射生理盐水,剂量与模型组相同。初次免疫70天后行模型评价,通过酶联免疫法检测小鼠血清中乙酰胆碱受体抗体(Ach R-Ab)滴度,行新斯的明试验,并观察肌无力症状评分等综合指标来确定模型标准,造模期间隔日记录体重变化。最终纳入模型小鼠共26只,将造模成功的模型组小鼠随机分为健脾补肾方中药组8只(4.5g/kg·d)、激素组9只(9mg/kg·d)、生理盐水组9只(0.2ml),最终同造模期间的正常对照组10只(0.2ml),自分组当天起每日灌胃给药一次,疗程2周。期间记录小鼠肌无力症状评分及体重变化,治疗前后采用酶联免疫法检测血清白介素-4(IL-4)、转化生长因子-β(TGF-β)含量。结果:依据模型判定标准最终纳入模型组小鼠为26只,成模率为52%,造模成功后的模型组小鼠出现明显肌无力症状,具体表现为行动缓慢,饮食量减少,体重增长缓慢。正常对照组行动及饮食均正常,未出现肌无力症状。模型组在抗体滴度及肌无力症状评分方面与正常对照组相比有显著统计学意义(P0.01)。模型组小鼠行新斯的明试验后在肌无力症状改善方面,给药后较给药前对比有显著统计学意义(P0.01)。将模型组随机分三组治疗2周后,各组在症状评分及体重方面相比,中药组及激素组较生理盐水组有显著统计学意义(P0.01),而中药组改善程度低于激素组,组间对比有统计学差异(P0.01)。在治疗2周后小鼠血清IL-4、TGF-β滴度变化方面,中药组与激素组较生理盐水组对比有显著统计学意义(P0.01),而中药组滴度变化低于激素组,组间对比有统计学差异(P0.01)。结论:1、采用鼠源乙酰胆碱受体a亚基97-116肽段免疫C57BL/6小鼠能够成功建立EAMG模型,造模成功率相对较高。2、模型制备成功后经健脾补肾方中药治疗可以显著减少EAMG小鼠的症状评分,缓解肌无力症状,提示健脾补肾方对EAMG小鼠治疗有效。3、健脾补肾方对EAMG小鼠作用的免疫学机制是通过下调血清中IL-4水平的表达,或提高TGF-β水平的表达,使T细胞、B细胞的活化及增值程度降低,从而抑制自身免疫反应,起到改善肌无力症状的作用。
【关键词】：实验性自身免疫性重症肌无力 健脾补肾方 白介素-4(IL-4) 转化生长因子β(TGF-β) 重症肌无力
【学位授予单位】：河南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R746.1
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 英文缩略词表10-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 鼠源乙酰胆碱受体a亚基97-116肽段建立EAMG模型(实验1)13-20
• 2.1 材料与方法13-16
• 2.1.1 实验材料与仪器13-14
• 2.1.2 实验步骤与方法14-16
• 2.2 结果16-20
• 2.2.1 EAMG模型组小鼠成模率及实验小鼠的死亡情况16
• 2.2.2 EAMG模型组小鼠肌无力症状评分16-17
• 2.2.3 EAMG模型组小鼠体重的变化17-18
• 2.2.4 EAMG模型组小鼠新斯的明试验后症状评分18
• 2.2.5 EAMG模型组小鼠AChR-Ab滴度18-20
• 第三章 健脾补肾方治疗EAMG小鼠的疗效与机制研究(实验2)20-27
• 3.1 材料与方法20-22
• 3.1.1 实验材料与仪器20
• 3.1.2 实验步骤与方法20-22
• 3.2 结果22-27
• 3.2.1 健脾补肾方对EAMG小鼠症状评分的影响22-23
• 3.2.2 健脾补肾方对EAMG小鼠体重的影响23-24
• 3.2.3 健脾补肾方对EAMG小鼠血清IL-4水平的影响24-25
• 3.2.4 健脾补肾方对EAMG小鼠血清TGF-β水平的影响25-27
• 第四章 讨论27-33
• 4.1 EAMG小鼠模型诱导27-28
• 4.2 健脾补肾方来源及解析28-29
• 4.3 健脾补肾方治疗EAMG小鼠机制探讨29-31
• 4.4 本实验的不足之及下一步设想31-33
• 第五章 结论33-34
• 致谢34-35
• 参考文献35-37
• 附录 文献综述37-47
• 参考文献45-47

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