Snhg8/miR-384/Hoxa13/FAM3A通路调控缺血缺氧导致的鼠神经元凋亡的分子机制

发布时间：2023-03-30 00:02

　　目的:研究表明长链非编码RNA参与多种疾病的病理生理过程,在维持细胞内环境稳态方面发挥重要作用。然而长链非编码RNA调控缺血性脑损伤的具体机制仍不清楚。本研究旨在探究长链非编码RNA Snhg8调控慢性脑缺血诱导神经元凋亡的具体机制。研究方法:利用HT22细胞及C57BL/6 J小鼠构建CCI体外模型及在体模型。在CCI体外模型及在体模型中检测Snhg8,miR-384及Hoxa13的表达水平,应用PCR技术检测Snhg8和miR-384的表达,应用western blot技术检测Hoxa13的表达。在HT22细胞中稳定转染Snhg8过表达质粒、Hoxa13过表达质粒及FAM3A过表达质粒,瞬时转染agomir-384和antagomir-384,Hoxa13过表达质粒(含或不含3’端非翻译区);在构建的细胞系中分别检测Snhg8,miR-384及Hoxa13的表达。PCR检测Snhg8及miR-384的表达,应用Western blot检测Hoxa13及FAM3A的表达;流式细胞术检测HT22细胞的凋亡率。双荧光素酶报告基因系统检测miR-384与Snhg8、Hoxa13的结合;染色...

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
2 材料和方法
    2.1 .主要试剂和仪器
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 细胞株
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养与CCI处理
        2.2.2 实验动物与分组
        2.2.3 手术操作与在体转染
        2.2.4 Real-time PCR
        2.2.5 Western blot实验
        2.2.6 细胞转染
        2.2.7 流式细胞技术检测HT22细胞凋亡
        2.2.8 末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测小鼠海马神经元凋亡
        2.2.9 RNA结合蛋白免疫沉淀法(RIP)实验
        2.2.10 染色质免疫沉淀(ChIP)
        2.2.11 双荧光素酶报告基因检测
        2.2.12 统计学方法
3 实验结果
    3.1 CCI在体模型及体外模型中Snhg8和Hoxa13 低表达,mi R-384 高表达
    3.2 过表达Snhg8 与沉默mi R-384 均可抑制CCI诱导的小鼠海马神经元凋亡
    3.3 Mi R-384 靶向作用于Snhg8 并部分逆转Snhg8 诱导的神经元保护作用
    3.4 Hoxa13 通过作用于FAM3A启动子区减轻CCI诱导的神经元凋亡,过表达FAM3A可抑制神经元凋亡
    3.5 过表达mi R-384 通过作用于Hoxa133'UTR端部分逆转过表达Hoxa13 诱导的神经保护功能
    3.6 在体实验中过表达Snhg8 结合沉默mi R-384 可减轻CCI诱导的神经元凋亡
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3774767