小鼠胚胎大脑皮质活化和静息神经干细胞的初步分离与鉴定

发布时间：2023-04-01 02:11

　　目的:从小鼠胚胎大脑皮质中分离并鉴定静息和活化的神经干细胞。方法:通过流式细胞术,从胚胎14.5 d的小鼠大脑皮质中分选出大小不同的细胞团;利用免疫荧光技术检测神经干细胞标志物Pax6以及增殖标志物Ki67的表达变化;借助RT-qPCR分析两组细胞中干细胞标志基因Pax6、Oct4、Sox2和Nanog的表达情况;采用流式细胞术及RT-qPCR分析两组细胞所处的周期;体外培养对大、小细胞组进行增殖能力检测。结果:免疫荧光结果表明,分离出的两类细胞均表达Pax6,且大细胞组Ki67为阳性,小细胞组为阴性。细胞周期分析显示,小细胞组G₀/G₁期比例高于大细胞组,而G₂/M期为0,且cyclin A和cyclin B的表达显著低于大细胞组(P<0.05)。体外培养显示,相对于大细胞,小细胞形成的微球数量少,速度慢;大、小细胞形成的微球消化后,Pax6和Ki67染色均阳性,且阳性率无显著差异(P>0.05)。结论:大、小细胞团分别为活化和静息的神经干细胞。活化的干细胞具有较强的增殖能力,而静息干细胞自我复制与增殖能力...

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【文章目录】：
材料和方法
    1 动物
    2 主要试剂
        2.1 细胞培养试剂
        2.2 抗体及其他试剂
        2.3 实验仪器
    3 主要方法
        3.1 大脑皮层单细胞悬液制备
        3.2 流式细胞术
        3.3RT-qPCR
        3.4 细胞周期的检测
        3.5 细胞培养
        3.6 免疫荧光染色
    4 统计学处理
结果
    1小鼠E14.5大脑皮质经流式细胞术分选为大、小两团细胞
    2大细胞主要为神经干细胞，小细胞部分为神经干细胞
    3 RT-qPCR检测大、小细胞团干细胞特异性标志基因的表达
    4 大、小细胞增殖特性的检测
    5 大、小细胞的细胞周期及周期相关蛋白的检测
    6 大、小细胞体外培养特性不同
    7 小细胞在体外可以被激活成具有大细胞活性的细胞
讨论



本文编号：3776252