梓醇和前B细胞克隆增强因子的神经保护作用

发布时间：2023-06-02 19:51

　　本研究以帕金森(PD)和脑缺血损伤模型为例,采用原代皮层纯星形胶质细胞培养体系、皮层或中脑纯神经元培养体系以及中脑神经元-星形胶质细胞混合培养体系作为研究对象,探讨梓醇和PBEF在神经退行性疾病中的保护作用和机理,主要内容如下： 1.梓醇的神经保护作用 梓醇在纯星形胶质细胞培养体系中的神经保护作用。一方面,采用H202诱导的星形胶质细胞氧化应激损伤,结果发现,梓醇能够明显提高细胞活力,减少细胞内ROS的形成。此外,梓醇还通过增强谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等谷胱甘肽代谢循环中关键酶的活性以及降低氧化型谷胱甘肽(GSSG)在总谷胱甘肽(GSx)中的比例,从而抑制H202诱导的氧化应激损伤。但是,梓醇对过氧化氢酶(CAT)活性的增强作用却并不明显,说明梓醇在此损伤模型中潜在的保护机制主要是增强谷胱甘肽代谢循环效率以及抑制ROS生成。另一方面,采用脂多糖(LPS)与干扰素-Y(IFN-Y)共同刺激星形胶质细胞诱导炎症反应,结果表明,梓醇显著抑制了一氧化氮(NO)和ROS的生成,削弱了诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。此外,梓醇还明显下调了相关炎症基因iNOS...

【文章页数】：131 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
引言
1. 文献综述
    1.1 帕金森综合症概述
        1.1.1 PD的致病机制
        1.1.2 PD的预防与治疗措施
        1.1.3 PD模型的构建
    1.2 脑缺血缺氧损伤的概述
        1.2.1 脑缺血的致病机制
        1.2.2 脑缺血损伤模型的构建
    1.3 星形胶质细胞概述
        1.3.1 星形胶质细胞的特性
        1.3.2 星形胶质细胞的生物学功能
        1.3.3 星形胶质细胞与神经元之间的相互作用
        1.3.4 星形胶质细胞与神经元之间的谷氨酸-谷氨酰胺代谢偶联
        1.3.5 星形胶质细胞的激活与炎症反应
    1.4 NAD、NAM和PBEF的研究概况
        1.4.1 NAD的合成与代谢过程
        1.4.2 PBEF的生物学功能
    1.5 梓醇的研究概况
        1.5.1 梓醇的理化性质
        1.5.2 梓醇的药理活性
    1.6 选题依据
2. 梓醇在纯星形胶质细胞培养体系中的神经保护作用
    2.1 实验材料与设备
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠皮层纯星形胶质细胞培养
        2.2.2 免疫细胞化学染色
        2.2.3 细胞活力测定
        2.2.4 ROS含量测定
        2.2.5 GSx与GSSG含量测定
        2.2.6 GR活性测定
        2.2.7 GSH-Px活性测定
        2.2.8 CAT活性测定
        2.2.9 NO含量和iNOS活性测定
        2.2.10 反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)
        2.2.11 NF-KB表达的测定
        2.2.12 统计学分析方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 梓醇对H202诱导的星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用
            2.3.1.1 星形胶质细胞的形态学观察
            2.3.1.2 H202最佳损伤浓度的筛选
            2.3.1.3 梓醇对H202诱导的星形胶质细胞损伤的保护作用
            2.3.1.4 梓醇对H202诱导的星形胶质细胞ROS生成的影响
            2.3.1.5 梓醇对星形胶质细胞GSx与GSSG含量的影响
            2.3.1.6 梓醇对星形胶质细胞GR、GSH-Px和CAT活性的影响
        2.3.2 梓醇对LPS+IFN-Y诱导的星形胶质细胞激活的抑制作用
            2.3.2.1 梓醇对LPS+IFN-Y诱导的星形胶质细胞激活的形态学影响
            2.3.2.2 梓醇对LPS+IFN-Y诱导的星形胶质细胞NO生成和iNOS活性的影响
            2.3.2.3 梓醇对LPS+IFN-Y诱导的星形胶质细胞ROS生成的影响
            2.3.2.4 梓醇对LPS+IFN-Y诱导的星形胶质细胞炎症因子表达的影响
            2.3.2.5 梓醇对LPS+IFN-Y诱导的星形胶质细胞NF-KB活性的影响
    2.4 讨论
    2.5 小结
3. 梓醇在中脑纯神经元培养体系中的神经保护作用
    3.1 实验材料与设备
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 小鼠中脑纯神经元的培养
        3.2.2 免疫细胞化学分析
        3.2.3 Hoechst 33258染色
        3.2.4 流式细胞仪分析凋亡与坏死
        3.2.5 NO含量测定
        3.2.6 免疫印记(Western Blotting)
        3.2.7 统计学分析方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 梓醇对鱼藤酮诱导的中脑多巴胺能神经元损伤的保护作用
        3.3.2 梓醇对鱼藤酮诱导的中脑神经元凋亡与坏死的影响
        3.3.3 梓醇对鱼藤酮诱导的中脑神经元NO生成和iNOS表达的影响
        3.3.4 梓醇对鱼藤酮介导的JNK和ERK信号通路的调控
    3.4 讨论
    3.5 小结
4. 梓醇在中脑神经元-星形胶质细胞混合培养体系中的神经保护作用
    4.1 实验材料及设备
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 小鼠中脑神经元.星形胶质细胞混合培养
        4.2.2 细胞活力与LDH的测定
        4.2.3 细胞线粒体提取
        4.2.4 ROS含量测定
        4.2.5 线粒体膜电位(MMP)的测定
        4.2.6 线粒体复合物I活性测定
        4.2.7 线粒体通透性转运孔(MPTp)开放度的测定
        4.2.8 细胞内钙离子(Ca2+)测定
        4.2.9 统计学分析方法
    4.3 实验结果
        4.3.1 梓醇对MPP+诱导的中脑神经元损伤的的保护作用
        4.3.2 梓醇对MPP+诱导的线粒体功能紊乱的影响
        4.3.3 梓醇对MPP+诱导的ROS生成和Ca2+超载的影响
        4.3.4 梓醇对MPP+诱导的MPTp开放的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
5. PBEF在脑缺血缺氧损伤中的神经保护作用
    5.1 实验材料与设备
        5.1.1 实验动物
        5.1.2 主要试剂
        5.1.3 主要仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 原代皮层神经元的培养以及OGD模型的构建
        5.2.2 细胞的存活与死亡测定
        5.2.3 免疫细胞化学染色
        5.2.4 活细胞实时成像测定MMP
        5.2.5 细胞内NAD+含量测定
        5.2.6 细胞内ATP含量测定
        5.2.7 细胞转染
        5.2.8 线粒体生物合成的测定
        5.2.9 统计学分析方法
    5.3 实验结果
        5.3.1 外源NAD+与NAM对OGD及谷氨酸诱导的神经元损伤的保护作用
        5.3.2 外源NAD+与NAM对FK866引起的神经元损伤的保护作用
        5.3.3 FK866加剧OGD诱导的神经元损伤与NAD+耗竭
        5.3.4 PBEF通过调节NAD+合成削弱神经元损伤
        5.3.5 PBEF在正常或OGD损伤条件下对细胞ATP水平的影响
        5.3.6 PBEF在损伤条件下对线粒体生物合成的影响
        5.3.7 PBEF在谷氨酸兴奋性毒性损伤中对MMP的影响
    5.4 讨论
    5.5 小结
结论与展望
    结论
    展望
创新点
参考文献
附录 缩略词表
攻读博士学位期间发表学术论文情况
致谢
作者简介



本文编号：3827925