循环外泌体miR-339-5p在脑缺血损伤中调控血管内皮细胞功能的机制研究

发布时间：2023-06-05 00:37

　　研究背景:缺血性卒中是指因供血动脉狭窄或堵塞导致局部脑组织供血不足的一种急性脑血管病,最终发展为部分脑功能丧失,具有发病率、致死率、致残率高的特点。目前,临床上药物治疗手段仍以组织纤溶酶原激活剂溶栓为主,但治疗时间窗狭窄和再灌注损伤风险大的缺点限制了其临床应用。内皮细胞,作为血脑屏障的基本组成,在脑缺血损伤过程中对维持血脑屏障的功能、减少神经炎症的发生至关重要。然而,目前仍然没有找到理想的“内皮细胞保护剂”应对缺血引起的血管内皮损伤问题。因此,从新的视角寻找血管内皮干预策略,是当前缺血性脑卒中防治共同关注的研究命题之一。近年来,外泌体(Exosomes)作为细胞分泌的一种可携带大量生物信息穿过血脑屏障的囊泡,在缺血性脑卒中的诊断和治疗方面具有巨大潜力。因此,以外泌体作为研究切入点,探索卒中病程中潜在的分子靶点并进行干预,对建立有效的卒中干预策略具有重大意义。研究目的:以外泌体中含量丰富的mi RNA为研究对象,寻找缺血性卒中患者循环外泌体中差异表达的mi RNA。论证差异表达mi RNA是否可以作为缺血性脑卒中治疗的有效靶点。实验方法和结果:1.过夜超速离心法从患者血清样本中纯化外泌体...

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1 引言
2 实验仪器与材料
    2.1 实验仪器
    2.2 材料
3 实验方法
    3.1 细胞培养
    3.2 OGD模型构建
    3.3 蛋白提取与定量
    3.4 免疫印迹(Western Blot)
    3.5 细胞免疫荧光(Immunocytochemistry)
    3.6 RNA提取及RT-qPCR荧光定量分析
    3.7 去外泌体培养基的制备和外泌体提取
    3.8 透射电镜观察外泌体的形态
    3.9 外泌体粒径检测
    3.10 miRNA转录组学分析
    3.11 mimics/inhibitor转染
    3.12 TUNEL染色
    3.13 流式细胞凋亡检测
    3.14 原代细胞培养
    3.15 MCAO模型建立
    3.16 统计学方法
4 实验结果
    4.1 超速离心提取血清外泌体方法学构建
    4.2 缺血性脑卒中患者组血清外泌体含量相较于正常对照组上调
    4.3 缺血性脑卒中患者血清外泌体miRNAs表达谱生物信息学分析
    4.4 MCAO模型小鼠的梗死灶miR-339-5p上调
    4.5 OGD上调PC12 细胞和其外泌体中的miR-339-5p
    4.6 OGD模型中内皮细胞接收更多外泌体miR-339-5p
    4.7 miR-339-5p减少OGD损伤模型导致的内皮细胞凋亡
    4.8 miR-339-5p可能通过下调BAX和 BCL2L11 减少内皮细胞凋亡
    4.9 miR-339-5p减少OGD损伤导致的内皮细胞炎症因子上调
5 讨论
6 结论
参考文献
综述 外泌体在中枢神经系统疾病诊断和治疗中的研究进展
    参考文献
作者简历及在学期间所取得的科研成果



本文编号：3831335