α-Synuclein过表达与相关蛋白的相互作用体内外研究

发布时间：2024-01-08 20:04

　　目的:探讨α-Synuclein过表达对N2A细胞内相关蛋白表达和功能的影响以及对转基因小鼠相关蛋白表达的影响。方法:(1)构建帕金森病体外细胞模型:利用脂质体将野生型α-Synuclein-pEGFP重组质粒转染进N2A细胞,通过G418筛选获得稳定克隆,并通过Western blot和免疫细胞化学鉴定目的基因α-Synuclein-GFP在细胞中的稳定表达(2)观察α-Synuclein过表达对N2A细胞蛋白表达的影响:分别以稳定过表达α-Synuclein的N2A细胞株(α-Syn-N2A)作为实验组和相同传代次数的野生型N2A细胞株(N2A)作为实验组和对照组,用不同的抗体标记蛋白,通过Western blot法检测实验组和对照组蛋白表达量的差异(3)观察α-Synuclein过表达对N2A细胞功能的影响:通过MTT法检测实验组和对照组细胞存活率的差异。观察添加6-OHDA、NH3CL/LEUPEPTIN、AMP-Deoxynojirimycin、NMDA和MK-801对实验组和对照组细胞存活率的影响(4)测量实验组和对照组全细胞葡萄糖脑苷脂酶的活性;纯化细胞溶酶体,测量实验组...

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

本文编号：3877582