线粒体ND4、ND5基因变异与颞叶癫痫的相关性研究

发布时间：2017-05-27 14:09

  本文关键词：线粒体ND4、ND5基因变异与颞叶癫痫的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过比较颞叶癫痫患者与正常正常组之间ND4、ND5基因变异情况的不同,探究颞叶癫痫与ND4、ND5基因变异间的相关性,探讨颞叶癫痫形成机制以及寻求新的抗癫痫治疗分子靶点。方法:(1)实验分组:51例颞叶癫痫患者癫痫组,16名健康成年人为正常组。(2)对癫痫组颞叶癫痫患者及正常组成员采集病史及相关信息,并采外周静脉血样本,置于-80℃冰箱内备用。(3)利用Flexi Gene DNA Kit,提取线粒体DNA;利用Bioer PCR热循环仪对线粒体ND4、ND5基因进行扩增;利用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测。(4)用sanger测序技术对存在的突变位点进行检测。结果:(1)癫痫组患者及健康对照者的年龄、性别构成无显著性差异。颞叶癫痫组患者具有病史长、药物控制情况差、复发率高、受教育程度普遍较低的特点。(2)癫痫组51名颞叶癫痫患者线粒体ND4基因共发现119处单核苷酸碱基改变,异质性突变13处,同质性突变103处。线粒体ND5基因共发现124处单核苷酸碱基改变,其中异质性突变9处,同质性突变115处。(3)24名颞叶癫痫患者ND4基因存在引起氨基酸改变的单核苷酸改变,2名正常组ND4基存在引起氨基酸改变的单核苷酸改变,行卡方检验,P=0.013,存在统计学意义。27名颞叶癫痫患者ND5基因存在引起氨基酸改变的单核苷酸改变,9名对照者ND5基因存在引起氨基酸改变的单核苷酸改变,行卡方检验,P=0.817,无统计学意义。(4)ND4基因所有引起氨基酸改变突变位点在癫痫组及正常组间比较,P值均大于0.05,无统计学意义。(5)颞叶癫痫患者线粒体ND4基因所发现的20个可引起编码氨基酸改变突变位点中,3个突变位点曾在相关疾病的研究中被报道,其余17个位点为本次实验新发现突变位点;线粒体ND5基因所发现的24个可引起编码氨基酸改变突变位点中,6个突变位点曾在相关疾病的研究中被报道,其余18个位点为本次实验新发现突变位点。结论:(1)线粒体ND4基因变异与颞叶癫痫的易感性存在关联,但具体变异位点尚不能明确。(2)线粒体ND5基因变异与颞叶癫痫的易感性无关联。(3)本实验发现了35种未在相关疾病中报道的线粒体DNA突变位点,进一步说明了线粒体DNA高突变率的特点,并可能成为进一步探究线粒体ND4、ND5基因与TLE相关性的潜在位点。
【关键词】：颞叶癫痫 线粒体基因 ND4 ND5
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742.1
【目录】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 第1章 引言13-14
• 第2章 文献综述14-19
• 2.1 线粒体及生理功能14-15
• 2.2 线粒体基因的遗传及突变特点15-16
• 2.3 线粒体功能障碍与TLE16-17
• 2.3.1 线粒体功能障碍与TLE的相关性16
• 2.3.2 线粒体功能障碍导致TLE发作的可能机制16-17
• 2.4 TLE相关的线粒体突变基因17-18
• 2.5 ND4、ND5 基因研究现状18
• 2.6 展望18-19
• 第3章 实验方法19-25
• 3.1 研究对象及分组19
• 3.1.1 癫痫组入组标准19
• 3.1.2 排除标准19
• 3.1.3 正常组入组标准19
• 3.2 实验材料19-21
• 3.2.1 主要试剂19-20
• 3.2.2 主要实验仪器20
• 3.2.3 主要溶液配制20-21
• 3.3 提取线粒体ND4、ND5 基因21-22
• 3.3.1 从 300μl的全血中分离提取DNA:21-22
• 3.3.2 DNA浓度计纯度测定22
• 3.4 线粒体ND4、ND5 基因PCR扩增22-23
• 3.4.1 PCR体外扩增线粒体ND4 基因区域基因片段22
• 3.4.2 PCR体外扩增线粒体ND5 基因区域基因片段22-23
• 3.5 PCR产物电泳23
• 3.5.1 制胶23
• 3.5.2 上样23
• 3.6 拍照23
• 3.7 测序23-24
• 3.8 统计学分析24-25
• 第4章 结果25-34
• 4.1 一般临床资料25-26
• 4.2 基因组提取结果26
• 4.3 PCR扩增产物26-27
• 4.3.1 线粒体ND4 区域经PCR扩增所得片段26
• 4.3.2 线粒体ND5 区域经PCR扩增所得片段26-27
• 4.4 线粒体ND4 基因变异测序结果27-31
• 4.4.1 线粒体ND4 变异率的比较27-28
• 4.4.2 线粒体ND4 基因错义突变位点变异率的比较28-30
• 4.4.3 线粒体ND4 基因部分突变位点峰图(见图 4~图 6)30-31
• 4.5 线粒体ND5 基因变异测序结果31-33
• 4.5.1 线粒体ND5 基因变异率比较31
• 4.5.2 线粒体ND5 基因变异位点31-32
• 4.5.3 线粒体ND5 基因部分突变位点检测峰图(图 7~图 9)32-33
• 4.6 未被报道的引起氨基酸改变的突变位点33-34
• 第5章 讨论34-38
• 第6章 结论38-39
• 参考文献39-45
• 作者简介及在学期间所取得的学术成果45-46
• 致谢46

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本文编号：400181