叶酸联合神经干细胞治疗小鼠局灶性脑缺血损伤

发布时间：2017-06-19 14:09

  本文关键词：叶酸联合神经干细胞治疗小鼠局灶性脑缺血损伤，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分:新生小鼠脊髓神经干细胞分离、培养及鉴定目的:分离培养新生小鼠脊髓神经干细胞,并进行增殖、分化的鉴定,为进一步研究脊髓神经干细胞的生物学特性奠定基础。方法:取6只新生小鼠,无菌预冷条件下取脊髓组织,采用机械分离吹打成单个细胞后,利用无血清进行原代细胞培养,采用机械法联合胰酶消化法对原代细胞进行培养和传代。应用免疫荧光法行巢蛋白,CD133染色,微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色,对脊髓神经干细胞及分化产物进行鉴定。结果:从小鼠脊髓中分离的神经干细胞具有克隆的能力,克隆细胞呈巢蛋白、CD133免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-tubulinⅢ和GFAP阳性细胞。结论:机械法分离新生小鼠脊髓细胞。使用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代和培养,能够成功获得脊髓神经干细胞,能够诱导其分化为神经元和星型胶质细胞。第二部分:叶酸联合脊髓神经干细胞治疗小鼠局灶性脑梗目的:研究叶酸联合脊髓神经干细胞对缺血性脑卒中小鼠的治疗作用,探讨其可能的机制。方法:60只昆明雄鼠随机分为3组,脑梗组(A组),脑梗+神经干细胞移植组(B组),脑梗+神经干细胞+叶酸注射组(C组)。在脑梗前28d和脑梗后23天C组给予叶酸悬液。每周测量各组血清叶酸浓度。用光栓法建立脑缺血小鼠动物模型。在脑梗后第2天移植BrdU标记的神经干细胞。在小鼠脑梗后第21天,随机从各组取5只小鼠,切片后行尼氏染色和Fluo-Jade染色,同时计数神经元。用免疫双标法检测双阳性细胞数;用疫印迹法检测脑组织中凋亡基因Bax、Caspsse-3的表达。结果:与A组和B组相比,C组血清叶酸浓度明显增高。与A组相比,C组顶叶皮质神经元数增多(P0.05);与A组和B组相比,C组免疫荧光双标阳性细胞数高(P0.05);与A组相比,C组凋亡蛋白Bax、Caspsse-3含量下降(P0.05)。结论:通过补充叶酸,能提高小鼠血清血清叶酸浓度,促进移植神经干细胞存活和分化,同时减轻中枢神经中细胞的凋亡,从而达到治疗作用。
【关键词】：脊髓 神经干细胞 培养 鉴定 叶酸 局灶性脑梗死
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 缩略词表7-10
• 前言10-11
• 第一章 新生小鼠脊髓神经干细胞分离、培养及鉴定11-20
• 引言11
• 1.1 材料与方法11-13
• 1.1.1 实验动物、实验试剂及实验仪器11
• 1.1.2 取材及神经干细胞原代培养11-12
• 1.1.3 脊髓神经干细胞传代培养12
• 1.1.4 脊髓神经干细胞的鉴定(CD133免疫化学染色)12-13
• 1.1.5 Brd U掺入法脊髓神经干细胞增殖能力鉴定13
• 1.1.6 脊髓神经干细胞分化培养及鉴定13
• 1.2 结果13-18
• 1.2.1 原代培养结果13-14
• 1.2.2 传代培养结果14-15
• 1.2.3 脊髓神经干细胞的鉴定结果15-16
• 1.2.4 Brd U脊髓神经干细胞的鉴定结果16-17
• 1.2.5 脊髓神经干细胞分化培养及鉴定结果17-18
• 1.3 讨论18-20
• 第二章 叶酸联合神经干细胞治疗小鼠缺血性脑卒中20-33
• 引言20
• 2.1 材料和方法20-26
• 2.1.1 实验动物、实验试剂及实验仪器20-21
• 2.1.2 实验分组及实验流程21-22
• 2.1.3 局灶性脑梗模型制备22-23
• 2.1.4 移植前神经干细胞制备23
• 2.1.5 神经干细胞脑内移植23
• 2.1.6 灌流取材切片23-24
• 2.1.7 尼氏染色、Fluo-Jade染色及顶叶皮质神经数目24
• 2.1.8 免疫荧光双标法检测双阳性细胞24-25
• 2.1.9 免疫印迹法检测脑组织凋亡基因的表达25
• 2.1.10 统计学分析25-26
• 2.2 结果26-32
• 2.3 讨论32-33
• 参考文献33-39
• 综述：神经递质对神经干细胞增殖的调控39-45
• 参考文献43-45
• 在学期间的研究成果45-46
• 致谢46

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  本文关键词：叶酸联合神经干细胞治疗小鼠局灶性脑缺血损伤，，由笔耕文化传播整理发布。

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