间充质干细胞向食道组织细胞诱导分化及其在食道组织再生中的应用
发布时间：2017-04-03 15:03
本文关键词：间充质干细胞向食道组织细胞诱导分化及其在食道组织再生中的应用，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的 探讨间充质干细胞（MSC）向食道平滑肌细胞、上皮细胞诱导分化的有效方法和机制，为食道组织工程提供种子细胞；探索电纺丝纤维、脱细胞食道粘膜与生物可降解聚氨酯（PU）复合支架的构建以及动物体内重建修复食道缺损的可行性方法。 方法 以密度梯度法提取和培养MSC，流式细胞术检测CD29、CD34、CD45、CD44、CD90的表达情况。分别采用与成熟平滑肌细胞共培养，EGF等诱导剂直接诱导的方法，诱导MSC向平滑肌细胞和上皮细胞分化，通过形态观察、免疫荧光染色等方法检测上述诱导方法的有效性。另一方面，以静电纺丝法制备PCL/SF（聚己内酯/丝素）多孔纳米纤维（模拟食道基膜niche），表面活性剂联合DNA酶法制备脱细胞食道粘膜基质，以生物可降解PU为基材制备具有微槽图案的支架（支持肌组织生长），以正常食道的组织学构造为导向，复合上述多层支架构造，制备了可同时支持食道组织中粘膜、粘膜下层和肌层细胞和组织再生的复合支架。以MSC为种子细胞，新西兰大白兔为实验动物，首先行背部皮下埋植以检测支架的组织相容性及支架在体内的作用，包括炎症、周围组织供血、支架降解等；其次，建立小型动物缺损模型，以片状支架植入颈段食道，以检测支架与体内食道的作用以及修复小范围食道缺损的可行性；最后，在上述实验成功的基础上，构建管状食道支架，建立原位替代整环食道使其再生的技术，包括粘膜和肌层的再生。 结果 培养的MSC细胞梭形，呈旋涡状排列，强表达间充质干细胞的特征蛋白CD29、CD44、CD90；不表达CD34、CD45。诱导分化的MSC分别表达平滑肌细胞、上皮细胞的特异蛋白α-actin和CK14。动物皮下实验结果显示支架具有良好的生物学性能；原位替代实验中，，所有兔子未出现吻合口瘘，染色结果显示手术部位实现上皮化，并可见平滑肌再生。 结论 MSC采用上述方法可以完成平滑肌细胞、上皮细胞的诱导分化。由电纺丝纤维、脱细胞食道粘膜与有槽化聚氨酯（PU）复合构建的支架，能支持MSC的生长，植入动物体内未出现免疫排斥，可原位支持食道粘膜和肌层的再生，这些技术有望实现对病变食道缺损的修复。
【关键词】：间充质干细胞 诱导分化 食道组织工程 电纺丝 脱细胞食道粘膜 支架
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318.08
【目录】：
- 摘要4-6
- Abstract6-10
- 引言10-14
- 1 材料与仪器设备14-16
- 1.1 实验材料14-15
- 1.2 实验仪器15-16
- 2 种子细胞获取与支架制备16-20
- 2.1 细胞原代培养与诱导分化16-18
- 2.1.1 间充质干细胞细胞（MSC）提取、培养16
- 2.1.2 流式细胞术检测 MSC16
- 2.1.3 MSC 的诱导分化及鉴定16-17
- 2.1.4 MSC 诱导分化的鉴定17-18
- 2.2 支架构建18-20
- 2.2.1 基膜蛋白液和丝素蛋白的制备18
- 2.2.2 图案化 PU 支架的制备18-19
- 2.2.3 电纺丝/PU 复合支架制备19
- 2.2.4 脱细胞基质/PU/电纺丝复合支架制备19-20
- 3 MSC 细胞相容性与组织相容性研究20-23
- 3.1 MTT 检测细胞的生长增殖20
- 3.2 皮下实验20-21
- 3.2.1 皮下植入20
- 3.2.2 组织切片与染色20-21
- 3.3 食道原位替代实验21-23
- 3.3.1 电纺丝/PU 支架替代21-22
- 3.3.2 MSC/电纺丝/PU 支架替代22
- 3.3.3 脱细胞基质/PU 支架替代22
- 3.3.4 再生组织取材及检测22-23
- 4 结果23-37
- 4.1 MSC 的培养及鉴定23-24
- 4.2 MSC 向平滑肌细胞诱导分化24-26
- 4.3 MSC 向上皮细胞诱导分化26-28
- 4.4 支架的细胞相容性28
- 4.5 支架的组织相容性-动物实验28-37
- 4.5.1 皮下实验28-30
- 4.5.2 电纺丝/PU 支架30-33
- 4.5.3 MSC/电纺丝/PU 支架33-35
- 4.5.4 脱细胞基质/PU 支架35-37
- 5 讨论37-40
- 6 结论40-41
- 参考文献41-46
- 附录A 主要试剂配制46-48
- 附录B 中英文词对照48-49
- 在学研究成果49-50
- 致谢50
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈霄莲;刘小云;陈松林;;与成肌细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞分化[J];广东医学;2012年22期
2 苗莉;何国祥;景涛;刘建平;蒋清安;江明宏;;骨髓间充质干细胞与血管平滑肌细胞直接接触培养后的分化及超微结构改变[J];医学研究生学报;2007年04期
3 陈玲;吕静静;於学禅;康骋;竺亚斌;;静电纺丝法构建食道上皮组织[J];生物工程学报;2013年12期
4 杨照;周新民;樊代明;韩英;时永全;王敬博;张懿;;生物型人工肝的新种子细胞来源-诱导性多潜能干细胞[J];胃肠病学和肝病学杂志;2010年03期
5 陈运贤;何敏;刘建华;陈嘉榆;陈惠珍;张祥忠;朱小玉;陈求刚;项鹏;钟雪云;;心肌梗死大鼠血清促进大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用[J];中国病理生理杂志;2007年05期
6 方利君,付小兵,王玉新,孙同柱,程飚;体外诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞的研究[J];中华实验外科杂志;2004年02期
7 刘伟;钱东华;钱明;彭丽萍;;人胚肺间充质干细胞对损伤肺组织的修复作用[J];中国老年学杂志;2010年08期
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本文编号：284500
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