水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵的研究

发布时间：2020-11-20 06:34

　　 壳聚糖是由甲壳素经脱乙酰化反应后制得,其通过对红细胞的聚集、对血小板的激活、激活凝血机制以及降低纤维蛋白的溶解等方面起到止血效果。本实验首先通过甲壳素羧甲基化和脱乙酰化两步反应,合成具有特定脱乙酰度的水溶性O-羧甲基壳聚糖。然后,采用O-羧甲基壳聚糖为主要原料,复合其他止血材料,以戊二醛作为交联剂,通过冷冻干燥技术制备水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵。我们通过动物实验证实：水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵止血效果优于目前临床常用的止血材料,生物相容性好,愈创效果显著,有利于消除瘢痕生成。 本研究首先通过羧甲基化和脱乙酰化两步反应,对C6位伯羟基进行选择性羧甲基取代,并通过超声纯化去除反应杂质,制得水溶性极佳的O-羧甲基壳聚糖。通过红外光谱分析、X-射线衍射分析及差示扫描量热-热重分析进行物性验证。结果表明,合成的0-羧甲基壳聚糖的羧甲基仅局限于C6的伯羟基取代,产率为78.14%。采用胶体滴定法测定O-CMC的脱乙酰度为44.53%,取代度为0.64；一点法测得黏均分子量为1.42×104。O-羧甲基壳聚糖在中性和碱性条件下水溶性好,溶液澄清,在水中的溶解度为4.636g,等电点为4.46,0.5%水溶液pH值为7.52。 本研究采用星点设计-效应面法进行水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵的处方优化。在单因素实验的基础上,确定了0-羧甲基壳聚糖(主成分)、戊二醛(交联剂)、氯化钙(凝血启动原)3个自变量的范围和重量比例(10：0.1：5)。建立日本大耳朵兔耳动脉、静脉创伤出血模型和SD大鼠股动脉创伤出血模型,以止血时间(Y1)、出血量(Y2)作为考察指标,采用星点设计-效应面原理,通过Design-Expert软件分析,筛选止血海绵中O-羧甲基壳聚糖、戊二醛、氯化钙的最优处方,然后进行处方验证,结果显示,兔耳动、静脉创伤出血模型的预测性能较好,选择O-羧甲基壳聚糖2.49%、戊二醛1.08%、氯化钙2.11%时,制备的止血海绵效果最佳。 本研究对自制水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵的理化性质进行观察。该止血海绵呈类白色,疏松多孔,具有良好的韧性。内部孔径100～200μm,孔隙率65.11%,吸水率38.29%,密度0.045g·cm-3,在生理盐水中浸泡8周,外观形态完整,不破损分散。 本研究进行了自制水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵对兔耳动脉、静脉以及大鼠股动脉创伤模型的止血效果研究。采用市售可吸收明胶海绵作阳性对照,医用纱布作阴性对照,以止血时间和出血量作为指标,评价自制水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵的止血效果。研究结果显示,自制海绵与可吸收明胶海绵相比,止血时间有显著性差异(P0.05),且续发性再出血情况更少。我们认为,自制水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵的止血效果较市售可吸收明胶海绵更佳。 本研究考察了自制水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵对兔背部创面皮肤的愈合效果。观察全厚层皮肤伤口分别施以自制海绵和市售可吸收明胶海绵后的愈合情况,测量伤口尺寸的大小并进行组织学切片。研究结果显示,自制海绵能更有效地促进创面愈合,愈合后创面干净,渗出物少。
【学位单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2012
【中图分类】：R318.08
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一章 O-羧甲基壳聚糖的制备及表征
    第一节 O-羧甲基壳聚糖的制备
        1 材料与方法
        2 O-羧甲基壳聚糖的制备
        3 结果与讨论
    第二节 O-羧甲基壳聚糖的表征和测定
        1 材料与方法
        2 试验方法及结果
            2.1 O-羧甲基壳聚糖黏均分子量的测定
            2.2 O-羧甲基壳聚糖取代度及脱乙酰度的测定
            2.3 O-羧甲基壳聚糖红外光谱分析
            2.4 O-羧甲基壳聚糖差示扫描量热-热重分析
            2.5 O-羧甲基壳聚糖x射线衍射分析
            2.6 O-羧甲基壳聚糖的溶解度
            2.7 O-羧甲基壳聚糖的等电点
    本章小结
第二章 水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵的处方筛选
    第一节 水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵的处方优化
        1 材料和仪器
        2 实验方法
            2.1 制备方法
            2.2 单因素考察
            2.3 处方优化的实验设计
        3 结果与讨论
            3.1 兔耳动、静脉创伤出血模型实验结果
            3.2 大鼠股动脉创伤出血模型实验结果
            3.3 处方验证
    第二节 水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵的表征和测定
        1 材料和仪器
        2 实验方法
            2.1 自制海绵的形态
            2.2 自制海绵的孔隙率
            2.3 自制海绵的吸水率
            2.4 自制海绵的密度
            2.5 自制海绵的生理盐水耐受力
        3 结果与讨论
    本章小结
第三章 水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵的止血作用
    1 材料及动物
    2 实验方法
        2.1 兔耳动、静脉创伤出血模型
        2.2 大鼠股动脉创伤出血模型
        2.3 止血可靠性观察
        2.4 统计方法
    3 结果与讨论
        3.1 不同创伤出血模型的止血效果比较
        3.2 止血可靠性观察结果
    本章小结
第四章 水溶性O-羧甲基壳聚糖止血海绵的皮肤创伤促愈合作用
    1 实验材料
    2 实验方法
        2.1 全皮层切除伤口模型
        2.2 伤口尺寸
        2.3 愈合情况
        2.4 组织学观察
    3 实验结果与讨论
        3.1 表观愈合情况观察
        3.2 伤口尺寸测量测量结果
        3.3 HE染色结果
        3.4 讨论
    本章小结
结语与创新
参考文献
文献综述
    参考文献
发表论文
申请专利
致谢

【参考文献】

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本文编号：2891090