1肝再生增强因子（ALR）对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 2甲状旁腺激素对骨折愈合有效性和安全性的荟萃分析
发布时间：2020-12-11 07:13
目的探讨肝再生增强因子（Augmenter of liver regeneration,ALR）对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法用限制性内切酶Sac I单酶切重组质粒pPICZαA-rhALR使其线性化后电转入酵母菌GS115中,在含博来霉素的YPD平板上筛选出高拷贝阳性转化酵母菌落,以甲醇诱导分泌表达rhALR。经镍柱亲和层析纯化表达的上清蛋白,再用SDS-PAGE胶电泳和Western Blot鉴定。CCK-8检测获得rhALR对人肝癌细胞HepG2的促增殖活性。利用细胞贴壁分离法体外分离小鼠骨髓间充质干细胞,通过连续传代达到一步步纯化骨髓间充质干细胞的目的,在显微镜下观察细胞形态学变化,利用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞的表面抗原标志物以鉴定细胞的纯度;CCK-8法检测不同浓度ALR（1-100ug/mL）组与阴性对照组作用于小鼠骨髓间充质干细胞48h后对细胞增殖的影响;使用碱性磷酸酶检测试剂盒检测ALR组和经典成骨诱导组诱导7天后碱性磷酸酶活性变化;采用茜素红染色检测ALR组和经典成骨诱导组成骨诱导14天后钙结节形成情况,并利用实时荧光定量PCR法检测ALR组和对照组成骨...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒pPICZαA-rhALR的酶切鉴定
22图 2 重组质粒 pPICZαA-rhALR 测序结果Figure 2 Squencing analysis of pPICZαA-rhALR3.2 重组酵母菌表达及表达条件优化利用高拷贝重组菌在甲醇诱导下可分泌表达 rhALR。目的蛋白分子量约为17.5kD（带 His-tag）。为提高蛋白表达量，我们选用了不同的诱导时间 24h，48h，96h。实验证实诱导表达时间达到 96h 时，目的蛋白表达量达到最高。收集分泌表达的上清蛋白进行 SDS-PAGE 胶电泳，后行考马斯亮蓝染色，结果见图 3。
A 空质粒上清液蛋白 B 诱导后上清液蛋白 C 诱导前上清液蛋白 M Marker图 3 SDS-PAGE 胶电泳分析 rhALR 的表达igure 3 The analysis of the rhALR expression by SDS-PAGE gel electrophoresis产物 Western Blot 鉴定进一步验证表达上清里诱导出的分子量约 17.5kD 的蛋白为 rhALR。对品做 Western Blot 分析，首先上样跑 SDS-PAGE 电泳并考马斯亮蓝染且均一的目的条带，分子量约为 17.5Kd。后进行重新上样电泳-转膜-封，二抗-显影，利用 ALR 特异性抗体检测到单一条带。证实 rhALR 在功地分泌表达，且甲醇诱导 96h 时表达量最高。见图 4。M a b c dA B
【参考文献】：
期刊论文
[1]Adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells: An update on their phenotype in vivo and in vitro[J]. Patrick C Baer. World Journal of Stem Cells. 2014(03)
[2]Osteogenic potential: comparison between bone marrow and adipose-derived mesenchymal stem cells[J]. Han-Tsung Liao,Chien-Tzung Chen. World Journal of Stem Cells. 2014(03)
本文编号：2910112
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒pPICZαA-rhALR的酶切鉴定
22图 2 重组质粒 pPICZαA-rhALR 测序结果Figure 2 Squencing analysis of pPICZαA-rhALR3.2 重组酵母菌表达及表达条件优化利用高拷贝重组菌在甲醇诱导下可分泌表达 rhALR。目的蛋白分子量约为17.5kD（带 His-tag）。为提高蛋白表达量，我们选用了不同的诱导时间 24h，48h，96h。实验证实诱导表达时间达到 96h 时，目的蛋白表达量达到最高。收集分泌表达的上清蛋白进行 SDS-PAGE 胶电泳，后行考马斯亮蓝染色，结果见图 3。
A 空质粒上清液蛋白 B 诱导后上清液蛋白 C 诱导前上清液蛋白 M Marker图 3 SDS-PAGE 胶电泳分析 rhALR 的表达igure 3 The analysis of the rhALR expression by SDS-PAGE gel electrophoresis产物 Western Blot 鉴定进一步验证表达上清里诱导出的分子量约 17.5kD 的蛋白为 rhALR。对品做 Western Blot 分析，首先上样跑 SDS-PAGE 电泳并考马斯亮蓝染且均一的目的条带，分子量约为 17.5Kd。后进行重新上样电泳-转膜-封，二抗-显影，利用 ALR 特异性抗体检测到单一条带。证实 rhALR 在功地分泌表达，且甲醇诱导 96h 时表达量最高。见图 4。M a b c dA B
【参考文献】：
期刊论文
[1]Adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells: An update on their phenotype in vivo and in vitro[J]. Patrick C Baer. World Journal of Stem Cells. 2014(03)
[2]Osteogenic potential: comparison between bone marrow and adipose-derived mesenchymal stem cells[J]. Han-Tsung Liao,Chien-Tzung Chen. World Journal of Stem Cells. 2014(03)
本文编号：2910112
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/swyx/2910112.html
