应用胶原支架结合骨髓间充质干细胞重建犬膀胱的实验研究

发布时间：2017-04-09 14:25

  本文关键词：应用胶原支架结合骨髓间充质干细胞重建犬膀胱的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景：近年来随着在组织工程领域的进步与发展，该技术已在一些临床应用中获得了成功，作为该领域在泌尿系统中应用也逐渐成为研究和探索的热点。临床上常见到由于先天性疾病、创伤、炎症、感染、肿瘤等各种因素导致膀胱结构与功能的严重破坏，需要进行修复与重建。目前临床上主要采取胃肠道节段作为膀胱修复与重建的替代品，但因组织器官来源与功能的迥异，存在诸多难以避免的并发症，严重影响到患者的生存质量。 既往组织工程技术修复与重建膀胱的研究表明，单纯应用支架材料修复与重建膀胱，存在如支架挛缩、瘢痕形成、炎症反应严重以及移植物萎缩和钙化等并发症及膀胱平滑肌层再生能力弱，从而影响到重建器官结构与功能的恢复。骨髓间充质干细胞作为一种具有极强分化潜能的种子细胞，并且具备易于自体获取、扩增传代能力强、免疫排斥低等优势，成为近年来在组织工程研究领域的新焦点。 第一部分：通过利用胶原支架材料复合骨髓间充质干细胞建立犬膀胱缺损重建模型 目的：利用胶原支架材料重建修补犬膀胱，从而建立可行的组织工程犬膀胱修复重建模型。 方法：选用健康的10月龄成年比格犬12只，随机分为假手术对照组、单纯胶原支架修复组、胶原支架结合骨髓间充质干细胞修复组。行犬膀胱次全切除，将膀胱上部约占膀胱总体积2/3予以切除，保留膀胱三角区及膀胱颈，分别应用单纯胶原支架或结合骨髓间充质干细胞胶原支架修补重建膀胱缺损，术后对犬切口恢复情况、排尿及存活情况进行严密观察。 结果：术后除B组一只动物因膀胱破裂导致腹腔感染于术后2天死亡外，其余均正常生存，在拔除尿管后可自行正常排尿。 结论：选用该组织工程材料复合骨髓间充质干细胞修复重建膀胱具有较好的可行性。 第二部分：胶原支架结合骨髓间充质干细胞重建犬膀胱后对重建膀胱的结构及功能的初步实验研究 目的：通过利用胶原生物材料结合骨髓间充质干细胞尝试修复重建犬膀胱。 方法：将12只雄性比格犬随机分为三组，A组（n=4）：对照组，B组（n=4）：单纯胶原生物材料修复组，C组（n=4）：胶原生物材料结合骨髓间充质干细胞修复组，建立B和C组犬膀胱缺损动物模型，分别利用单纯胶原生物材料或胶原材料结合骨髓间充质干细胞重建膀胱。各组于修复后23周行尿动力学检查及泌尿系影像学检查，均于术后24周处死动物后，对标本进行取材，并通过对标本大体观察及组织学检查评估膀胱膀胱再生情况。 结果：术后除B组一只动物因膀胱破裂导致腹腔感染于术后2天死亡外，其余均正常生存，在拔除尿管后可自行正常排尿。取材行大体观察发现支架生物材料均降解吸收，膀胱内未发现占位、结石病变。尿动力学检查数据，经统计学证实A、C组在最大膀胱容量、膀胱顺应性、最大膀胱逼尿肌压差异无统计学意义（P0.05），与B组在最大膀胱容量、膀胱顺应性差异有统计学意义（P0.05）。影像学检查各组间未见明显异常。通过组织学检查发现各组膀胱移行上皮细胞再生情况均较满意，但B组膀胱平滑肌再生明显较差，无完整正常形态肌层组织再生，其中C组膀胱平滑肌层再生尚可，有较为完整的各层平滑肌结构。 结论：通过生物支架材料结合种子细胞这种组织工程技术重建修复膀胱，证实利用胶原支架材料结合骨髓间充质干细胞具有较好的促进膀胱组织再生修复能力，尤其在膀胱平滑肌再生方面。 第三部分：胶原支架结合重建犬膀胱后对上尿路结构及功能影响的探讨 目的：应用胶原支架重建犬膀胱后，观察其对上尿路可能造成的结构和功能的影响。 方法：随机将8只雄性比格犬分为两组，A组（n=4）：单纯对照组，B组（n=4）：胶原材料修复组，通过对B组比格犬建立起膀胱缺损模型，应用胶原材料对膀胱缺损进行修复重建。各组于修复前后23周行肾脏彩色超声检查及血流显像观察、肾功相关生化指标测定以及24h尿量、24h尿蛋白定量测定，并于术后24周处死动物，对标本进行取材，对肾脏、输尿管行大体观察及组织学相关检查，通过对上述指标观察从而分析膀胱重建后对上尿路结构和功能所产生的影响。 结果：术后除B组一只动物因膀胱破裂导致腹腔感染于术后2天死亡外，其余均正常生存，在拔除尿管后可自行正常排尿。通过对手术前后肾功相关生化指标测定、24h尿量及24h尿蛋白定量结果进行统计学分析，两组间上述指标差异无统计学意义（P0.05）。肾脏彩色超声检查及血流显像观察发现各组动物肾脏形态、结构、肾脏动静脉血流信号均无异常，未发现肾结石、肾盂肾盏扩张积水、肾脏囊实性占位改变。通过对大体标本观察发现各组动物肾脏、输尿管未发现结石、肿瘤形成，无明显占位及新生物改变。组织学检查观察发现各组间粘膜细胞层完整，上皮细胞排列整齐致密，输尿管及肾间质未发现充血水肿及明显炎性细胞浸润改变，各组肾小球、肾小管无明确病理改变情况，肾脏系膜细胞未出现大量增生。 结论：应用胶原支架材料重建犬膀胱后未对上尿路产生不良影响，这种组织工程重建膀胱方法具有进一步的应用价值。
【关键词】：胶原支架材料 骨髓间充质干细胞 膀胱重建 胶原支架材料 骨髓间充质干细胞 膀胱重建 膀胱平滑肌 胶原支架 组织工程 肾脏 输尿管
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R699;R318.08
【目录】：

• 缩略语表4-5
• Abstract5-9
• 摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 通过利用胶原支架材料复合骨髓间充质干细胞建立犬膀胱缺损重建模型14-22
• 2.1 实验材料与实验动物14-16
• 2.2 实验方法16-20
• 2.3 实验结果20-21
• 2.4 讨论21
• 2.5 小结21-22
• 第三章 胶原支架结合骨髓间充质干细胞重建犬膀胱后对重建膀胱的结构及功能的初步实验研究22-33
• 3.1 实验仪器及试剂22-23
• 3.2 实验方法23-26
• 3.3 实验结果26-30
• 3.4 讨论30-32
• 3.5 小结32-33
• 第四章 组织工程重建犬膀胱后对上尿路结构及功能影响的探讨33-40
• 4.1 实验仪器及试剂33-34
• 4.2 实验方法34-35
• 4.3 实验结果35-39
• 4.4 讨论39
• 4.5 小结39-40
• 全文总结40-41
• 参考文献41-43
• 文献综述43-50
• 参考文献48-50
• 硕士期间所发表的文章50-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：295479