重组腺病毒介导的sip38抑制钛颗粒诱导的破骨细胞形成和骨溶解

发布时间：2017-04-16 04:26

  本文关键词：重组腺病毒介导的sip38抑制钛颗粒诱导的破骨细胞形成和骨溶解，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：实验目的：探讨MAPKs(丝裂原活化蛋白激酶)在钛颗粒诱导的破骨细胞形成中的作用,并通过腺病毒介导的siRNA干扰p38的表达,观察sip38对钛颗粒诱导的破骨细胞形成和骨溶解的影响及可能机制。实验方法：1.体外实验中,采用钛颗粒悬液(0.1mg/m1)刺激原代破骨细胞前体细胞,通过TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶)染色、Western Blot观察钛颗粒对破骨细胞成熟分化及相关蛋白TRAP的影响,并通过Western Blot检测MAPKs(p38 MAPK,ERK,JNK)信号通路的激活情况。2.通过Western Blot、免疫荧光等检测经腺病毒介导的sip38干扰后各组破骨细胞相关蛋白TRAP的表达,以及抗酒石酸酸性磷酸酶染色鉴定成熟破骨细胞,并通过PCR检测干扰p38后相关基因NFATc1、c-fos的变化.3.体内实验中,构建小鼠颅骨颗粒诱导骨溶解模型,通过HE染色、‘抗酒石酸酸性磷酸酶染色及免疫组化等,·观察不同处理组颅骨骨溶解及破骨细胞数目变化情况。实验结果：1.钛颗粒可通过激活p38 MAPK、JNK信号通路促进破骨细胞的分化成熟,并且p38 MAPK的激活更加明显。2.通过体外诱导培养破骨细胞并干扰p38的表达及磷酸化,观察到sip38可通过降低c-fos、NFATc1基因的表达,从而抑制钛颗粒诱导的破骨细胞分化成熟和特异性TRAP蛋白的表达。3.成功建立钛颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解模型,通过siRNA干扰p38的表达及激活后,破骨细胞数目及颗粒诱导的颅骨骨溶解明显减少。实验结论：本课题证明钛颗粒可通过p38 MAPK信号通路促进破骨细胞的分化成熟,通过腺病毒介导的小干扰RNA沉默p38可抑制p38 MAPK信号通路的激活,从而降低调控破骨细胞分化成熟的相关基因NFATc1及c-fos的表达,抑制磨损颗粒诱导的破骨细胞前体细胞的成熟分化。局部注射sip38可有效减少钛颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解。
【关键词】：无菌松动 钛颗粒 p38 MAPK 小干扰RNA 破骨细胞
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R318.17
【目录】：

• 缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-16
• 参考文献14-16
• 第一部分：钛颗粒对体外破骨细胞分化成熟的作用及机制研究16-25
• 1. 材料与方法16-20
• 2. 实验结果20-24
• 3. 实验结论24-25
• 第二部分：重组腺病毒介导的p38 siRNA抑制钛颗粒诱导的破骨细胞形成和骨溶解25-35
• 1. 材料和方法25-29
• 2. 实验结果29-34
• 3. 实验结论34-35
• 讨论35-37
• 参考文献37-39
• 文献综述39-46
• 参考文献42-46
• 致谢46-47
• 攻读硕士期间在国内外杂志发表文章情况47

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本文编号：310020