间充质干细胞联合明胶微冰胶材料对皮肤损伤治疗的可行性研究

发布时间：2017-04-21 09:07

  本文关键词：间充质干细胞联合明胶微冰胶材料对皮肤损伤治疗的可行性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目标：研究人脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)与明胶微冰胶材料体外联合培养时,材料是否能维持间充质干细胞的生物学特性。方法:ADSCs种植于明胶微冰胶材料后进行Calcein-AM和PI活细胞染色检测细胞活力,细胞滴度蓝法检测细胞增殖能力,定量PCR检测干性基因OCT4、Nanog、SOX2表达情况,以及在成脂成骨诱导过程比较ADSCs在普通环境和种植于明胶微冰胶材料后分化潜能。结果:ADSCs在三维明胶微冰胶支架材料中能保持较高活性,增殖能力不受影响,干性基因表达上调,但成脂成骨分化相关基因表达水平比普通诱导环境低。结论：明胶微冰胶可以为ADSCs提供一个较二维培养更好的微环境,有利于ADSCs体外干性维持,从而在干细胞移植法治疗相关疾病时以非侵入性的细胞传递方式发挥更长期的应用价值。目标：研究间充质干细胞联合三维可降解明胶微冰胶支架材料能否提高ADSCs对皮肤损伤的治疗效果。方法：裸鼠制作成全厚皮肤切割伤模型,按背部皮肤正方形创面上注射细胞或材料不同随机分成四组：未处理阴性对照组(sham)、细胞组(ADSCs)、材料组(GMs)、细胞+明胶微冰胶组(ADSCs+GMs),观察创伤愈合情况。Real-time PCR、Western blot和ELISA检测组织匀浆生长因子VEGF、HGF、 PDGFbb、bFGF、EGF基因和蛋白表达情况,活体成像实验和抗人细胞核免疫荧光染色追踪细胞体内存活和停留情况,HE染色观察皮肤创伤组织表皮和真皮愈合质量,免疫组化染色PCNA和CK14检测真皮和表皮再生情况,GFP阳性ADSCs和CK5、Hsp47、NG2和CD31共定位检测细胞是否通过转分化成皮肤角质细胞、成纤维细胞、周细胞和血管内皮细胞修复损伤。结果：ADSCs+GMs组皮肤创伤愈合优于ADSCs组、GMs组和sham组。创伤皮肤组织中生长因子VEGF、HGF、bFGF、EGF、PDGFbb表达量随时间不同程度上调,ADSCs+GMs组高于其他各组,ADSCs+GMs组的细胞在裸鼠组织中存活和停留时间较ADSCs组更好,ADSCs+GMs组创伤组织表皮和真皮再生能力较其他各组更好,血管形成数量更多。结论：ADSCs和明胶微冰胶支架二者联合应用时,明胶微冰胶支架为ADSCs功能发挥提供了一个更好的环境因素,主要通过延长ADSCs原位存活停留时间和促进ADSCs旁分泌能,在干细胞移植治疗皮肤损伤时发挥更好的应用价值。
【关键词】：人脂肪间充质干细胞 明胶微冰胶 脂肪间充质干细胞 明胶微冰胶 裸鼠皮肤损伤模型
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 第一部分 明胶微冰胶支架有利于脂肪来源间充质干细胞体外干性维持并提高其体内应用价值4-18
• 中文摘要4
• Abstract4-5
• 前言5-6
• 材料和方法6-13
• 实验结果13-16
• 讨论16-17
• 结论17
• 参考文献17-18
• 第二部分 人脂肪来源间充质干细胞和明胶微冰胶支架以输注方式传递到体内可提高裸鼠外科皮肤创伤愈合效果18-47
• 中文摘要18-19
• Abstract19-20
• 前言20-22
• 材料和方法22-33
• 实验结果33-42
• 讨论42-44
• 结论44
• 参考文献44-47
• 第三部分 论文综述 干细胞分化的表观遗传调控47-58
• 中文摘要47
• 英文摘要47-48
• 一、表观遗传学概念和内容48-51
• 二、表观遗传学和干细胞分化的关系51-54
• 三、DNA甲基化和组蛋白修饰之间的相互作用54-56
• 参考文献56-58
• 附录58-59
• 致谢59-60

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