一种具有原位血管再生潜能的小口径肝素化血管移植物的制备

发布时间：2017-04-27 13:14

  本文关键词：一种具有原位血管再生潜能的小口径肝素化血管移植物的制备，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：心血管疾病（Cardiovascular disease，CVD）是世界上发病率和死亡率最高的疾病之一，严重影响人类的健康。近年来随着我国人口的老龄化和居民饮食结构的改变，心血管疾病的发病率更是呈逐年上升趋势。血管移植术是目前有效治疗心血管疾病的手段，临床上应用的血管移植物主要有二个来源：自体血管和人工组织工程血管。虽然自体血管是最理想的血管移植物，但是常由于患者自身病变以及来源有限等不能满足临床需求，商品化的人工血管口径较大（＞6mm），且易形成血栓，不能满足冠状动脉以及周围动脉小口径血管的要求。因此寻求一种机械性能和生物性能俱佳的血管支架材料日益成为研究者关注的热点。为此本研究利用人新生儿脐动脉为原材料，通过酶-去污剂去细胞技术进行去细胞处理，制备去细胞血管支架。然后通过交联剂EDC和NHS，将肝素共价结合在去细胞血管支架上，制备出生物力学和血液相容性俱佳的肝素化血管支架。 方法：1.以新生儿脐动脉为血管材料，通过酶-去污剂去细胞技术，制备去细胞血管支架。通过HE染色、Hoechst染色观察去细胞血管支架细胞的形态学结构。2.通过交联剂EDC和NHS，将肝素以共价键的形式结合在去细胞血管支架上，制备肝素化血管支架。并通过甲苯胺蓝染色和傅里叶变换衰减全反射红外光谱分析（ATR-FTIR）来评价肝素化血管支架的肝素负载情况。3.通过HE染色、Masson三色染色和VG染色观察天然脐动脉、去细胞血管支架和肝素化血管支架的形态学结构变化；通过扫描电镜检测三种血管支架的内腔表面的超微结构形态；通过对胶原蛋白和蛋白多糖含量的测定来评价肝素化血管支架对血管基质的保留情况；通过对生物力学的测定来评价三种血管支架机械强度和顺应性的变化。4.分别通过血小板黏附试验和动静脉分流试验（AV-shunt），观察肝素化血管支架分别在体外和体内情况下的血液相容性。结果：1. HE染色、Hoechst染色发现，去细胞血管支架，不仅完全将血管中的细胞成分去除，而且血管基质结构保留完整，形态保持良好。2.甲苯胺蓝染色结果发现肝素沿着ECM中的纤维走向分布，，表明肝素结合在血管支架基质纤维的表面；肝素化血管支架ATR-FTIR图谱中出现了肝素分子的特征性吸收峰，并且酰胺键的吸收峰值变强，表明肝素已成功以共价键的形式固定在了血管支架上。3. HE染色、Masson三色染色和VG染色结果表明肝素化血管支架胶原纤维和弹力纤维均得到很好的保留；扫描电镜检测发现，去细胞血管支架经肝素化处理以后，内腔表面由多孔样结构重新变得光滑；在对胶原蛋白和蛋白多糖含量的测定结果发现肝素化血管支架较好地保留了天然血管ECM的主要成分胶原蛋白和蛋白多糖；通过对三种血管支架爆破强度和拉伸曲线的检测，发现肝素化血管支架生物力学性能相比去细胞血管支架得到很大程度的优化。4.在血小板黏附试验中，肝素化血管支架相比去细胞血管支架能显著地降低表面血小板的黏附和活化；在动静脉分流活体实验中得到与血小板黏附试验相一致的结果，并且对动静脉分流后血管支架血栓面积的统计表明，肝素化血管支架的血栓面积百分比远远低于去细胞血管支架，更能直观地说明肝素化血管支架在活体实验情况下能有效地抑制血栓形成。 结论：1.通过酶-去污剂去细胞方法，成功制备去细胞血管支架，血管基质形态和结构保留完整。2.成功制备出以共价键结合的肝素化血管支架。3.肝素化血管支架，保留了天然血管基质的复杂的三维结构和胞外基质成分，并且其生物力学性能相比去细胞血管支架得到很大程度的优化，满足血管移植物的要求。4.肝素化血管支架在体外实验和活体实验均能抑制血栓的形成，具有良好的血液相容性，为临床应用提供实验依据。
【关键词】：血管移植 小口径组织工程血管 去细胞血管支架 肝素化血管支架 抗血栓形成
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 前言4-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 英文缩略词表11-15
• 第1章 文献综述15-23
• 1.1 引言15
• 1.2 支架材料与制备方法15-21
• 1.2.1 可降解人工聚合物支架15-16
• 1.2.2 天然生物材料支架16-17
• 1.2.3 细胞膜片17-18
• 1.2.4 去细胞血管支架18-19
• 1.2.5 新型的仿生材料19
• 1.2.6 支架材料的表面修饰19-21
• 1.3 总结和展望21-23
• 第2章 实验研究23-51
• 第1节 去细胞血管支架的制备以及组织形态学鉴定23-27
• 1.1 实验材料23-24
• 1.2 实验方法24-25
• 1.3 实验结果25-27
• 第2节 肝素化脐动脉血管支架的制备以及理化性质鉴定27-32
• 2.1 实验材料27
• 2.2 实验方法27-30
• 2.3 实验结果30-32
• 第3节 肝素化血管支架理化性质及机械性能的实验研究32-42
• 3.1 实验材料32-33
• 3.2 实验方法33-37
• 3.3 实验结果37-42
• 第4节 肝素化血管支架抗血栓形成功能的实验研究42-51
• 4.1 实验材料42-43
• 4.2 实验方法43-46
• 4.3 实验结果46-51
• 第3章 讨论51-59
• 3.1 去细胞脐动脉血管支架的制备以及组织形态学鉴定51-52
• 3.2 肝素化血管支架的制备以及理化性质鉴定52-54
• 3.3 肝素化血管支架的理化性质及机械性能的测定54-56
• 3.4 肝素化血管支架具有抗血栓形成作用56-59
• 第4章 结论59-60
• 参考文献60-69
• 作者简介及在校期间所获科研成果69-70
• 致谢70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 吴春根;方宁涛;潘銮凤;;人脐动脉脱细胞支架的制备及其生物相容性[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年26期

  本文关键词：一种具有原位血管再生潜能的小口径肝素化血管移植物的制备，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：330688