血管平滑肌细胞在丝素蛋白多孔支架内的生长及细胞特性研究
发布时间：2021-09-04 23:39
现代社会心血管疾病的发病率日益提高,迫切需要开发血管替代物,特别是内径小于6毫米的血管替代物来替代患病的冠状动脉和膝下血管。目前涉及这种疾病的临床治疗方法是用自体血管或合成材料进行手术置换。然而,小口径人工血管还未获得临床应用,主要原因是血栓形成和新生内膜增厚使人工血管闭塞。因此原位诱导血管再生的可降解多孔人工血管的研究具有应用前景,可实现自体细胞长入及由这些自体细胞合成并沉积细胞外基质形成生物血管。为了深入解析丝素蛋白在人工血管应用上的可行性,我们开展了再生丝素蛋白多孔支架体外培养平滑肌细胞及其细胞外基质（弹性蛋白、胶原蛋白）合成研究。本文中我们利用冷冻干燥法在4%的丝素蛋白溶液质量分数以及-20℃的冷冻温度条件下制备再生丝素蛋白多孔支架,支架内部成型良好,孔径大小在60-200μm。接着研究其在接种平滑肌细胞后,材料上平滑肌细胞的增殖、合成细胞外基质（弹性蛋白、胶原蛋白）、细胞表型的情况以及转化生长因子-β1（TGF-β1）对细胞细胞外基质合成和平滑肌细胞表型的影响。首先,我们采用DNA含量分析法研究了细胞在多孔支架上的增殖,结果表明:丝素蛋白多孔膜上血管平滑肌细胞数量在1-3周持...
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
丝素白多支架截面图（左边为200倍放大，右边为400倍放大）
第二章 血管平滑肌细胞在丝素蛋白多孔支架内的生长及细胞特性研究DNA 含量分别从第一周的 0.078μg 和 0.109μg 增加到了第三周的 0.136μg 和 0.142μg，到了第四周，这两组材料的细胞 DNA 含量出现了下降，其中未添加 TGF-β1 的材料下降较多；持续添加 TGF-β1 的材料上细胞 DNA 含量从第一周到第四周保持增长的趋势，从第一周的 0.102μg 增长到第四周的 0.147μg，第三周后，细胞数量相对稳定。在培养过程中，持续添加 TGF-β1 的材料在第一周时 DNA 含量分别为未添加 TGF-β1材料和初始添加 TGF-β1 材料的 1.31 和 0.94 倍，到第四周，这两个值分别是 2.63 和1.26 倍，说明血管平滑肌细胞在丝素蛋白多孔支架上可正常生长与增殖，持续的TGF-β1 添加对血管平滑肌细胞在丝素蛋白多孔支架上的增殖起着促进作用，没有添加 TGF-β1 材料上的平滑肌细胞，由于体外的长时间培养，活力降低，细胞无法继续在支架内生长，出现脱落，所以在四周后 DNA 含量出现明显的额下降，持续添加TGF-β1 材料上的平滑肌细胞由于转化生长因子的加入，细胞活力保持较好，但材料内多孔结构复杂，细胞增殖后空间减少，在三周后生长就趋于稳定。
图 2-3 血管平滑肌细胞 丝素 白多 膜上 成的 性 白免疫 标染色 片A: 未添加 TGF-β1 多 支架 B: 始添加 TGF-β1 多 支架 C: 持续添加 TGF-β1 多 支架（标尺：50μm）图 2-4 性 白免疫 标半定量A: 未添加 TGF-β1 材 B: 始添加 TGF-β1 材 C: 持续添加 TGF-β1 材 （*表 品 间0.05 水平上有显 性差异、**表 品 间 0.01 水平上有显 性差异）
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞微环境对免疫细胞黏附与迁移的调控[J]. 张海龙,路玲,郑雅娟,袁萌芽,陈剑峰. 生命科学. 2016(02)
[2]转化生长因子-β1对人主动脉平滑肌细胞表型转化的影响及其机制[J]. 周孜孜,郗二平,王荣平,朱水波,朱健,张瑜. 中华实验外科杂志. 2015 (11)
[3]组织工程血管支架材料最适孔径的研究[J]. 汪黎明,陈鑫,徐明. 中华实验外科杂志. 2008 (02)
[4]血管组织工程支架材料的研究进展[J]. 刘国锋,杨大平,郭铁芳,郝晨光,马辉,王冬艳. 哈尔滨医科大学学报. 2007(03)
[5]腔内泌尿外科技术治疗输尿管狭窄[J]. 刘永达,袁坚,李逊,罗金泰,曾国华,吴开俊. 中华泌尿外科杂志. 2006(09)
[6]电刀和钬激光腔内切开对小猪肾盂输尿管连接部的形态学影响[J]. 何朝辉,李逊,曾国华,袁坚,单炽昌. 中华实验外科杂志. 2006(05)
[7]丝素蛋白作为生物材料的基础研究[J]. 谢菁,徐殿胜,陆兵,夏杰. 华东理工大学学报(自然科学版). 2006(04)
[8]壳聚糖-生物蛋白胶用于工程化血管构建的初步研究[J]. 徐迎新,尹太,李瑞新,吴仕和,王金晶,鄂玲玲,张西正,李荣. 中国康复理论与实践. 2005(08)
[9]优化RT-PCR法相对定量检测RNA的研究[J]. 宗成国,王晓波,徐廷国,于静,尹家俊. 中国实验诊断学. 2005(03)
[10]血管平滑肌细胞表型转化及相关信号转导机制探讨[J]. 张健,蔡生业. 心血管病学进展. 2005(02)
博士论文
[1]皮/芯结构的丝素/聚己内酯纤维及其双层血管再生支架[D]. 刘桂阳.苏州大学 2015
硕士论文
[1]再生丝素蛋白材料血管细胞共培养的研究[D]. 郝云霞.苏州大学 2016
[2]转化生长因子-β1诱导人主动脉平滑肌细胞表型转化的作用及机制研究[D]. 周孜孜.南方医科大学 2016
[3]丝素蛋白管状支架制备及其水蛭素改性研究[D]. 魏雅丽.苏州大学 2014
[4]涤纶人造血管材料表面改性及其性能研究[D]. 湛权.东华大学 2012
[5]TGF-β1对hUCMSCs基因表达谱、增殖和细胞外基质表达的影响[D]. 赵洁.山东大学 2011
本文编号：3384226
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
丝素白多支架截面图（左边为200倍放大，右边为400倍放大）
第二章 血管平滑肌细胞在丝素蛋白多孔支架内的生长及细胞特性研究DNA 含量分别从第一周的 0.078μg 和 0.109μg 增加到了第三周的 0.136μg 和 0.142μg，到了第四周，这两组材料的细胞 DNA 含量出现了下降，其中未添加 TGF-β1 的材料下降较多；持续添加 TGF-β1 的材料上细胞 DNA 含量从第一周到第四周保持增长的趋势，从第一周的 0.102μg 增长到第四周的 0.147μg，第三周后，细胞数量相对稳定。在培养过程中，持续添加 TGF-β1 的材料在第一周时 DNA 含量分别为未添加 TGF-β1材料和初始添加 TGF-β1 材料的 1.31 和 0.94 倍，到第四周，这两个值分别是 2.63 和1.26 倍，说明血管平滑肌细胞在丝素蛋白多孔支架上可正常生长与增殖，持续的TGF-β1 添加对血管平滑肌细胞在丝素蛋白多孔支架上的增殖起着促进作用，没有添加 TGF-β1 材料上的平滑肌细胞，由于体外的长时间培养，活力降低，细胞无法继续在支架内生长，出现脱落，所以在四周后 DNA 含量出现明显的额下降，持续添加TGF-β1 材料上的平滑肌细胞由于转化生长因子的加入，细胞活力保持较好，但材料内多孔结构复杂，细胞增殖后空间减少，在三周后生长就趋于稳定。
图 2-3 血管平滑肌细胞 丝素 白多 膜上 成的 性 白免疫 标染色 片A: 未添加 TGF-β1 多 支架 B: 始添加 TGF-β1 多 支架 C: 持续添加 TGF-β1 多 支架（标尺：50μm）图 2-4 性 白免疫 标半定量A: 未添加 TGF-β1 材 B: 始添加 TGF-β1 材 C: 持续添加 TGF-β1 材 （*表 品 间0.05 水平上有显 性差异、**表 品 间 0.01 水平上有显 性差异）
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞微环境对免疫细胞黏附与迁移的调控[J]. 张海龙,路玲,郑雅娟,袁萌芽,陈剑峰. 生命科学. 2016(02)
[2]转化生长因子-β1对人主动脉平滑肌细胞表型转化的影响及其机制[J]. 周孜孜,郗二平,王荣平,朱水波,朱健,张瑜. 中华实验外科杂志. 2015 (11)
[3]组织工程血管支架材料最适孔径的研究[J]. 汪黎明,陈鑫,徐明. 中华实验外科杂志. 2008 (02)
[4]血管组织工程支架材料的研究进展[J]. 刘国锋,杨大平,郭铁芳,郝晨光,马辉,王冬艳. 哈尔滨医科大学学报. 2007(03)
[5]腔内泌尿外科技术治疗输尿管狭窄[J]. 刘永达,袁坚,李逊,罗金泰,曾国华,吴开俊. 中华泌尿外科杂志. 2006(09)
[6]电刀和钬激光腔内切开对小猪肾盂输尿管连接部的形态学影响[J]. 何朝辉,李逊,曾国华,袁坚,单炽昌. 中华实验外科杂志. 2006(05)
[7]丝素蛋白作为生物材料的基础研究[J]. 谢菁,徐殿胜,陆兵,夏杰. 华东理工大学学报(自然科学版). 2006(04)
[8]壳聚糖-生物蛋白胶用于工程化血管构建的初步研究[J]. 徐迎新,尹太,李瑞新,吴仕和,王金晶,鄂玲玲,张西正,李荣. 中国康复理论与实践. 2005(08)
[9]优化RT-PCR法相对定量检测RNA的研究[J]. 宗成国,王晓波,徐廷国,于静,尹家俊. 中国实验诊断学. 2005(03)
[10]血管平滑肌细胞表型转化及相关信号转导机制探讨[J]. 张健,蔡生业. 心血管病学进展. 2005(02)
博士论文
[1]皮/芯结构的丝素/聚己内酯纤维及其双层血管再生支架[D]. 刘桂阳.苏州大学 2015
硕士论文
[1]再生丝素蛋白材料血管细胞共培养的研究[D]. 郝云霞.苏州大学 2016
[2]转化生长因子-β1诱导人主动脉平滑肌细胞表型转化的作用及机制研究[D]. 周孜孜.南方医科大学 2016
[3]丝素蛋白管状支架制备及其水蛭素改性研究[D]. 魏雅丽.苏州大学 2014
[4]涤纶人造血管材料表面改性及其性能研究[D]. 湛权.东华大学 2012
[5]TGF-β1对hUCMSCs基因表达谱、增殖和细胞外基质表达的影响[D]. 赵洁.山东大学 2011
本文编号：3384226
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