基于纳米胶束的Micelleplex输送小干扰RNA用于癌症治疗
发布时间：2021-11-16 13:58
癌症是危害人类生命健康的重大疾病之一,放疗和化疗均存在不可忽略的副作用,基于小干扰RNA （siRNA）的核酸类药物为癌症的治疗带来了新的可能。选取合适的靶基因,将针对该基因的siRNA导入肿瘤细胞中,下调其表达,可以安全有效地抑制肿瘤生长。另一方面,由于并不是所有看似“完美”的靶基因都能够通过siRNA直接沉默,当直接干扰其表达存在障碍时,可以绕开目的基因,对其合成致死相关基因进行干扰,在不损伤正常细胞的前提下,达到治疗效果。本论文发展基于纳米胶束的micelleplex载药系统,输运siRNA治疗癌症,探索siRNA药物抗肿瘤治疗方案。在前一部分,论文利用官能化的聚乙二醇单甲醚-聚己内酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物（mPEG-b-PCL-b-PPEEA）形成的胶束纳米颗粒,制备micelleplex,携载针对酸性神经酰胺酶的siAC,经系统给药后,将siAC输送至荷瘤小鼠的肿瘤细胞中,显著抑制了乳腺肿瘤的生长,为乳腺癌的治疗提供了新方法。在论文的后一部分,在KRAS突变的非小细胞肺癌肿瘤模型中,绕开了难以直接靶向的KRAS基因,利用KRAS与CDK4基因之间的合成致死效应,使用携载有针对...
【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 癌症临床治疗现状及其瓶颈
1.2 RNA干扰类药物在肿瘤治疗中的应用及面临的问题
1.3 纳米药物载体携载小干扰RNA用于肿瘤治疗
1.3.1 脂质类纳米载体
1.3.1.1 脂质体/脂质复合物
1.3.1.2 稳定的核苷酸脂质颗粒(stable nucleic acid lipid particle,SNALP)
1.3.2 聚合物类纳米载体
1.3.2.1 基于环糊精的纳米颗粒
1.3.2.2 基于壳聚糖的纳米颗粒
1.3.2.3 基于PEI的纳米颗粒
1.3.2.4 基于PLGA的纳米颗粒
1.3.2.5 基于树枝状大分子的纳米颗粒
1.3.3 siRNA键合物
1.3.4 siRNA输送体系的选择
1.4 RNA干扰靶点选择
1.5 选题依据
参考文献
第二章 基于阳离子型三嵌段共聚物的Micelleplex输送小干扰RNA用于癌症治疗
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 主要材料
2.2.2 细胞株
2.2.3 主要药品及试剂
2.3 实验方法
2.3.1 胶束纳米颗粒(MNPs)的制备
2.3.2 动态光散射检测胶束纳米颗粒的粒径分布及表面电位
2.3.3 琼脂糖凝胶阻滞实验检验胶束纳米颗粒结合siRNA的能力
2.3.4 细胞的传代培养
2.3.5 负载cy3-siRNA的纳米颗粒细胞内在化能力的研究
2.3.6 荧光素酶报告基因检测胶束纳米颗粒输送siRNA沉默目的基因的能力
2.3.7 PCR检测micelleplex_(siAC)对BT474细胞中AC mRNA表达的影响
2.3.8 Western Blot检测micelleplex_(siAC)对BT474细胞中AC蛋白表达的影响
2.3.9 检测micelleplex_(siAc)诱导BT474细胞产生凋亡
2.3.10 克隆形成实验检测micelleplex_(siAC)对BT474细胞增殖的影响
2.3.11 Micelleplex_(siAC)对乳腺癌细胞中凋亡相关蛋白表达的影响
2.3.12 BT474原位肿瘤模型建立
2.3.13 乳腺癌原位肿瘤的治疗及肿瘤体积测量
2.3.14 肿瘤组织中的AC表达水平的检测
2.3.15 TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡的情况
2.3.16 BrdU染色检测肿瘤组织中细胞的增殖情况
2.3.17 酶联免疫吸附实验(ELISA)检测荷瘤裸鼠血清中的免疫因子表达水平
2.4 结果与讨论
2.4.1 胶束纳米颗粒能有效携载siRNA
2.4.2 胶束纳米颗粒可以携载siRNA进入肿瘤细胞
2.4.3 Micelleplex_(siAC)下调报告基因Luciferase的表达
2.4.4 Micelleplex_(siAC)下调内源性基因酸性神经酰胺酶的表达
2.4.5 Micelleplex_(siAC)介导乳腺癌细胞的凋亡
2.4.6 Micelleplex_(siAC)有效抑制原位乳腺癌小鼠肿瘤的生长
2.4.7 Micelleplex_(siAC)下调肿瘤内源性基因AC的表达
2.4.8 免疫组化观察治疗结束后肿瘤的增殖水平以及凋亡水平
2.4.9 Micelleplex_(siAC)不引起天然免疫反应
2.5 本章小结
参考文献
第三章 混合胶束纳米粒制备的Micelleplex输送siRNA用于非小细胞肺癌的合成致死治疗
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 主要材料
3.2.2 细胞株
3.2.3 主要药品及试剂
3.3 实验方法
3.3.1 胶束纳米颗粒(MNP)的制备
3.3.2 动态光散射检测胶束纳米颗粒的粒径分布及表面电位
3.3.3 琼脂糖凝胶电泳实验检验胶束纳米颗粒与siRNA的结合能力
3.3.4 细胞的传代培养
3.3.5 Realtime PCR检测MNP_(siCDK4)对不同细胞系中CDK4 mRNA表达的影响
3.3.6 Western Blot检测MNP_(siCDK4)对各细胞中CDK4蛋白表达的影响
3.3.7 克隆形成实验检测MNP_(siCDK4)对细胞增殖的影响
3.3.8 MTT实验检测MNP_(siCDK4)对各细胞的杀伤效果
3.3.9 细胞共培养实验检测MNP_(siCDK4)对KRAS突变细胞的选择性杀伤作用
3.3.10 A549、H226皮下肿瘤模型的建立
3.3.11 非小细胞肺癌肿瘤的治疗及肿瘤体积测量
3.3.12 肿瘤组织中的CDK4表达水平的检测
3.3.13 Western blot检测肿瘤组织中KRAS的表达情况
3.3.14 Ki-67染色检测肿瘤组织中细胞的增殖情况
3.4 结果与讨论
3.4.1 混合胶束纳米颗粒能够有效携载siRNA
3.4.2 胶束纳米颗粒输送siRNA显著下调细胞中CDK4基因的表达
3.4.3 胶束纳米颗粒输送siCDK4特异性抑制KRAS突变细胞活力
3.4.4 胶束纳米颗粒输送siCDK4特异性抑制KRAS突变细胞增殖
3.4.5 MNP_(siCDK4)可特异性抑制KRAS突变非小细胞肺癌肿瘤的生长
3.4.6 MNP_(siCDK4)下调肿瘤内源性基因CDK4的表达
3.4.7 免疫组化观察治疗结束后肿瘤的增殖水平以及凋亡水平
3.5 本章小结
参考文献
附录一 主要仪器设备
附录二 常规试剂
附录三 主要溶液配制
附录四 常规实验方法
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的研究成果
本文编号：3499021
【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 癌症临床治疗现状及其瓶颈
1.2 RNA干扰类药物在肿瘤治疗中的应用及面临的问题
1.3 纳米药物载体携载小干扰RNA用于肿瘤治疗
1.3.1 脂质类纳米载体
1.3.1.1 脂质体/脂质复合物
1.3.1.2 稳定的核苷酸脂质颗粒(stable nucleic acid lipid particle,SNALP)
1.3.2 聚合物类纳米载体
1.3.2.1 基于环糊精的纳米颗粒
1.3.2.2 基于壳聚糖的纳米颗粒
1.3.2.3 基于PEI的纳米颗粒
1.3.2.4 基于PLGA的纳米颗粒
1.3.2.5 基于树枝状大分子的纳米颗粒
1.3.3 siRNA键合物
1.3.4 siRNA输送体系的选择
1.4 RNA干扰靶点选择
1.5 选题依据
参考文献
第二章 基于阳离子型三嵌段共聚物的Micelleplex输送小干扰RNA用于癌症治疗
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 主要材料
2.2.2 细胞株
2.2.3 主要药品及试剂
2.3 实验方法
2.3.1 胶束纳米颗粒(MNPs)的制备
2.3.2 动态光散射检测胶束纳米颗粒的粒径分布及表面电位
2.3.3 琼脂糖凝胶阻滞实验检验胶束纳米颗粒结合siRNA的能力
2.3.4 细胞的传代培养
2.3.5 负载cy3-siRNA的纳米颗粒细胞内在化能力的研究
2.3.6 荧光素酶报告基因检测胶束纳米颗粒输送siRNA沉默目的基因的能力
2.3.7 PCR检测micelleplex_(siAC)对BT474细胞中AC mRNA表达的影响
2.3.8 Western Blot检测micelleplex_(siAC)对BT474细胞中AC蛋白表达的影响
2.3.9 检测micelleplex_(siAc)诱导BT474细胞产生凋亡
2.3.10 克隆形成实验检测micelleplex_(siAC)对BT474细胞增殖的影响
2.3.11 Micelleplex_(siAC)对乳腺癌细胞中凋亡相关蛋白表达的影响
2.3.12 BT474原位肿瘤模型建立
2.3.13 乳腺癌原位肿瘤的治疗及肿瘤体积测量
2.3.14 肿瘤组织中的AC表达水平的检测
2.3.15 TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡的情况
2.3.16 BrdU染色检测肿瘤组织中细胞的增殖情况
2.3.17 酶联免疫吸附实验(ELISA)检测荷瘤裸鼠血清中的免疫因子表达水平
2.4 结果与讨论
2.4.1 胶束纳米颗粒能有效携载siRNA
2.4.2 胶束纳米颗粒可以携载siRNA进入肿瘤细胞
2.4.3 Micelleplex_(siAC)下调报告基因Luciferase的表达
2.4.4 Micelleplex_(siAC)下调内源性基因酸性神经酰胺酶的表达
2.4.5 Micelleplex_(siAC)介导乳腺癌细胞的凋亡
2.4.6 Micelleplex_(siAC)有效抑制原位乳腺癌小鼠肿瘤的生长
2.4.7 Micelleplex_(siAC)下调肿瘤内源性基因AC的表达
2.4.8 免疫组化观察治疗结束后肿瘤的增殖水平以及凋亡水平
2.4.9 Micelleplex_(siAC)不引起天然免疫反应
2.5 本章小结
参考文献
第三章 混合胶束纳米粒制备的Micelleplex输送siRNA用于非小细胞肺癌的合成致死治疗
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 主要材料
3.2.2 细胞株
3.2.3 主要药品及试剂
3.3 实验方法
3.3.1 胶束纳米颗粒(MNP)的制备
3.3.2 动态光散射检测胶束纳米颗粒的粒径分布及表面电位
3.3.3 琼脂糖凝胶电泳实验检验胶束纳米颗粒与siRNA的结合能力
3.3.4 细胞的传代培养
3.3.5 Realtime PCR检测MNP_(siCDK4)对不同细胞系中CDK4 mRNA表达的影响
3.3.6 Western Blot检测MNP_(siCDK4)对各细胞中CDK4蛋白表达的影响
3.3.7 克隆形成实验检测MNP_(siCDK4)对细胞增殖的影响
3.3.8 MTT实验检测MNP_(siCDK4)对各细胞的杀伤效果
3.3.9 细胞共培养实验检测MNP_(siCDK4)对KRAS突变细胞的选择性杀伤作用
3.3.10 A549、H226皮下肿瘤模型的建立
3.3.11 非小细胞肺癌肿瘤的治疗及肿瘤体积测量
3.3.12 肿瘤组织中的CDK4表达水平的检测
3.3.13 Western blot检测肿瘤组织中KRAS的表达情况
3.3.14 Ki-67染色检测肿瘤组织中细胞的增殖情况
3.4 结果与讨论
3.4.1 混合胶束纳米颗粒能够有效携载siRNA
3.4.2 胶束纳米颗粒输送siRNA显著下调细胞中CDK4基因的表达
3.4.3 胶束纳米颗粒输送siCDK4特异性抑制KRAS突变细胞活力
3.4.4 胶束纳米颗粒输送siCDK4特异性抑制KRAS突变细胞增殖
3.4.5 MNP_(siCDK4)可特异性抑制KRAS突变非小细胞肺癌肿瘤的生长
3.4.6 MNP_(siCDK4)下调肿瘤内源性基因CDK4的表达
3.4.7 免疫组化观察治疗结束后肿瘤的增殖水平以及凋亡水平
3.5 本章小结
参考文献
附录一 主要仪器设备
附录二 常规试剂
附录三 主要溶液配制
附录四 常规实验方法
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的研究成果
本文编号：3499021
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/swyx/3499021.html
