纳米羟基磷灰石的改良及其体外基因转染研究

发布时间：2017-05-08 07:09

  本文关键词：纳米羟基磷灰石的改良及其体外基因转染研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过化学共沉淀-水热合成法制备纳米羟基磷灰石,研究其制备过程中的若干影响因素对纳米羟基磷灰石形态结构及稳定性的影响,通过改良纳米的制备条件,结合PEI进行表面修饰,提高体外细胞的转染效率。 方法：通过透射电镜观察及粒径、电位测定,选择优化参数,通过聚乙烯亚胺进行表面修饰,测定修饰前后的纳米羟基磷灰石在室温的悬浮稳定性、与DNA的结合和保护能力及体外细胞转染能力。 结果：1)改良的实验参数为：Ca/P比1.67：1、Ca(NO3)2·4H2O与(NH4)2HPO4的初始浓度为0.15mmol/L、慢速混合(15滴/分),pH值为10-10.5、170℃,反应3小时、自然冷却(室温下放置24小时)。2)经PEI修饰后的nHAP具有更好的悬浮稳定性、DNA结合力及体外细胞转染率。 结论：1)在纳米羟基磷灰石制备过程中,Ca/P比、反应物初始浓度、反应物混合速率、反应pH值、反应的时间和温度等都会导致纳米的形态结构及热稳定性发生改变。2)当PEI浓度为4‰时,PEI-nHAP与质粒DNA结合稳定性最好。3)改良后的纳米羟基磷灰石转染Hela细胞的转染率约为6%,通过PEI修饰的纳米羟基磷灰石的转染率约为21%。(图25幅,表34个,参考文献31篇)
【关键词】：纳米羟基磷灰石 聚乙烯亚胺 化学共沉淀-水热合成法 基因载体 基因转染率
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-8
• 目录8-11
• 1 前言11-14
• 2 实验部分14-26
• 2.1 实验材料及设备14-16
• 2.1.1 主要试剂及材料14-15
• 2.1.2 主要实验设备15
• 2.1.3 实验所需培养基及试剂15-16
• 2.1.4 其他16
• 2.2 纳米羟基磷灰石的制备及修饰实验16-20
• 2.2.1 nHAP的制备及改良16-20
• 2.2.2 PEI修饰nHAP材料的制备20
• 2.3 nHAP、PEI-nHAP的体外细胞的转染实验20-26
• 2.3.1 nHAP、PEI-nHAP的悬浮稳定性20-21
• 2.3.2 保存质粒的转化、抽提、测序、纯化21-23
• 2.3.3 不同浓度的PEI修饰nHAP与质粒DNA的结合试验23
• 2.3.4 nHAP、PEI-nHAP与质粒DNA的结合实验23
• 2.3.5 nHAP、PEI-nHAP与质粒DNA的保护实验23
• 2.3.6 nHAP、PEI-nHAP介导pEGFP-N1-NT3基因在Hela细胞的体外转染23-26
• 3 实验结果26-45
• 3.1 nHAP的电镜表征及Ca/P的检测26-39
• 3.1.1 不同实验参数的纳米羟基磷灰石的透射电镜的表征26-39
• 3.2 nHAP、PEI-nHAP的体外细胞的转染实验39-45
• 3.2.1 nHAP、PEI-nHAP的悬浮稳定性39-41
• 3.2.2 保存质粒的测序41-42
• 3.2.3 不同浓度的PEI修饰nHAP与质粒DNA的结合试验42
• 3.2.4 不同浓度的nHAP、PEI-nHAP与质粒DNA的结合试验42-43
• 3.2.5 不同浓度的nHAP、PEI-nHAP与质粒DNA的保护实验43
• 3.2.6 nHAP、PEI-nHAP介导pEGFP-N1-NT3基因转染Hela细胞43-45
• 4 讨论45-49
• 4.1 纳米羟基磷灰石制备的实验参数的改良45-47
• 4.2 nHAP、PEI-nHAP的悬浮稳定性47-48
• 4.3 不同浓度的PEI修饰nHAP与质粒DNA的结合48-49
• 5 结论49-50
• 参考文献50-53
• 附录53-54
• 综述54-61
• 参考文献58-61
• 攻读学位期间主要的研究成果61-62
• 致谢62

【参考文献】

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本文编号：350673