体外构建工程化汗腺类器官的初步研究

发布时间：2021-12-24 10:15

　　目的应用谱系重编程技术将表皮角质细胞转分化为汗腺样细胞,并在体外构建三维培养体系,诱导工程化的汗腺样细胞自组装为汗腺类器官,以实现汗腺功能性修复。方法采用CRISPR/dCas9系统上调内源性外胚层发育不全(EDA)基因在人永生化表皮角质(HaCaT)细胞中的表达,筛选阳性克隆后进行诱导培养。将细胞分为HaCaT组(HaCaT细胞使用汗腺培养基培养)、HaCaT+Dox组(HaCaT细胞使用含5 μg/ml Dox的汗腺培养基培养)、HaCaT-E组(HaCaT-E细胞使用汗腺培养基培养)、HaCaT-E+Dox组(HaCaT-E细胞使用含5 μg/ml Dox的汗腺培养基培养),采用RT-PCR及Western blotting检测EDA基因在各组细胞中的表达水平,以验证质粒转染是否成功。另将细胞分为HaCaT-E组(汗腺培养基组)及HaCaT-E+Dox组(汗腺培养基+5 μg/ml Dox组),利用免疫荧光染色鉴定汗腺表面标记物的表达水平,以验证HaCaT细胞是否成功重编程为汗腺样细胞。随后以Matrigel为主体支架模拟汗腺发育微环境,在体外诱导汗腺样细胞自组装形成汗腺类器官,...

【文章来源】： 解放军医学杂志. 2020,45(04)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 病毒包装与收集
    1.3 细胞转染与筛选
    1.4 RT-PCR、Western blotting检测EDA表达水平
    1.5 经诱导后HaCaT-E的细胞免疫荧光染色
    1.6 汗腺类器官的体外构建与免疫荧光染色
    1.7 烫伤模型的建立及多细胞结构的移植
    1.8 碘-淀粉发汗实验及组织免疫荧光染色
    1.9 统计学处理
2 结 果
    2.1 质粒转染及阳性细胞筛选
    2.2 RT-PCR、Western blotting检测EDA的表达
    2.3 HaCaT-E细胞的形态特征及表型鉴定
    2.4 汗腺类器官的结构特征及表型鉴定
    2.5 汗腺类器官促进体内汗腺的功能性修复
3 讨 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]类器官技术在食管癌研究中的应用与展望 [J]. 李春震,朱勃睿,赵铁军.  解放军医学杂志. 2019(11)
[2]汗腺样细胞经冻存复苏后再生汗腺功能的研究[J]. 马奎,鲁刚,杨思明,孙同柱,付小兵,盛志勇.  感染、炎症、修复. 2011 (04)
[3]汗腺的种植(附2例报告) [J]. 盛志勇,付小兵,蔡飒,雷永红,孙同柱,白晓东,陈敏亮.  解放军医学杂志. 2008(04)



本文编号：3550300