人脐带间充质干细胞复合胶原支架治疗小型猪皮肤缺损的实验研究
发布时间：2022-01-03 15:03
目的探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）复合胶原支架用于小型猪全层皮肤缺损修复的治疗作用。方法在小型猪背部沿正中线两侧切取正方形全层皮肤缺损创面,随机分为两组,每组6个创面,分别给予胶原支架（对照组）及hUC-MSCs复合胶原支架（实验组）治疗。术后连续监测实验动物的生理状况及创面愈合情况,分别于治疗3周及6周切取创面组织进行HE染色,评估创面皮肤损伤修复效果;并通过CK14及Ki67免疫组织化学染色,评估治疗3周后表皮层细胞增殖情况。结果实验组治疗3周后皮肤创面愈合率[（91.25±3.58）%]明显高于对照组[（73.79±5.73）%]（P<0.05）。组织学检测结果表明,实验组治疗3周后创面再表皮化速度较对照组显著提高;治疗6周后,实验组新生表皮层结构较对照组完整且厚度均一,并可见类似正常皮肤的表皮钉突及真皮乳头结构。免疫组织化学分析显示,治疗3周后,实验组表皮层细胞CK14呈强阳性表达;实验组表皮基底层细胞Ki67阳性率[（35.03±6.46）%]较对照组[（2.07±1.07）%]显著提高（P<0.01）,表明实验组表皮层细胞增殖活跃。结论 hUCMSC...
【文章来源】：军事医学. 2020,44(03)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
hUC‐MSCsUC‐MSCs复合胶原支架治疗3周后创面愈合率分析
军事医学2020年3月第44卷第3期MilMedSci，Vol44，No3，Mar，2020图4hUC‐MSCsUC‐MSCs复合胶原支架治疗3周后创面愈合率分析（n=3）22.3组织学观察HE染色结果显示，治疗3周后，对照组可见大量炎性细胞浸润，未见表皮层形成（图5A，B）；而实验组创面再表皮化速度较对照组明显提高，具有良好的表皮结构（图5C，D）。治疗6周后，两组创面均已完成再表皮化，对照组表皮厚度不均一，表皮基底层平坦（图5E，F）；实验组修复状况良好，表皮层结构完整，可明显区分基底层、棘层、颗粒层和角质层，可见与正常皮肤组织相似的表皮钉突及真皮乳头结构，真皮层可见排列成束的胶原纤维（图5G，H）。图2hUC‐MSCsUC‐MSCs表面标志蛋白的流式细胞仪鉴定图3hUC‐MSCsUC‐MSCs复合胶原支架治疗3周后创面大体观察（黄色虚线指示创面区域）A.治疗前；B.对照组；C.实验组图5hUC‐MSCsUC‐MSCs复合胶原支架治疗3和6周后创面组织HE染色观察（A，C，E，G：scalebar=100μm；B，D，F，H：scalebar=25μm）A，B.对照组治疗3周；C，D.实验组治疗3周；E，F.对照组治疗6周；G，H.实验组治疗6周195
，Ki67抗体1∶200稀释），4℃孵育过夜，按试剂盒说明进行显色；然后用苏木素衬染细胞核后进行脱水处理，经中性树脂封片后观察。11.4统计学分析利用GraphPadPrism7软件进行数据分析，数据以xˉ±s表示。组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果22.1人脐带来源间充质干细胞培养及鉴定hUCMSCs在无血清培养体系下呈贴壁状态生长，培养10代以内的细胞增殖速度较快。倒置相差显微镜下观察，hUCMSCs胞体呈梭形，细胞密度高时呈漩涡状排列（图1）。图1hUUC‐MSCsC‐MSCs形态观察（scalebar=200μm）流式细胞分析显示，第3代细胞的基质细胞抗原CD105、CD90、CD73的表达阳性率分别为99.9%、100.0%及98.1%，而造血细胞表面抗原CD34、CD45、CD14、CD19、HLADR的表达均呈阴性（阳性率≤2%），符合MSCs的免疫表型特征（图2）。22.2小型猪皮肤大体观察及创面愈合率分析对实验动物进行6周连续观察。结果显示，单纯胶原支架组（对照组）与hUCMSCs复合胶原支架组（实验组）动物生存状态良好，体温正常，创面及周边区域均未出现红肿、感染、皮疹或其他急性过敏反应。初步表明，负载hUCMSCs的胶原支架免疫原性较低，具备一定的应用安全性。治疗3周后，对照组创面瘢痕挛缩明显，大部分区域形成褐色血痂，痂皮较厚且质地坚硬（图3B）；实验组创面修复效果显著改善，创面边缘区域缺损已基本愈合，皮肤具有一定弹性，创面中央区域仍有少量血痂（图3C）。对治疗3周后两组的创面面积进行分析，实验组创面面积较对照组明显缩小，两组创面愈合率分别为对照组（73.79±5.73）%，实验
【参考文献】：
期刊论文
[1]胶原-纤维蛋白胶膜复合脐带间充质干细胞修复小鼠全层皮肤创面的实验研究[J]. 南文滨,陈红丽,刘瑞,徐志浩,原志庆. 中华损伤与修复杂志(电子版). 2015(01)
[2]自体BMSCs复合胶原膜修复猪全层皮肤缺损[J]. 何丽娟,刘大庆,白慈贤,闫迎军,管利东,裴雪涛. 中国修复重建外科杂志. 2009(03)
[3]生物支架材料胶原膜交联前后的特性分析[J]. 陈琳,吕洋,管利东,王韫芳,何丽娟,李艳华,白慈贤,刘大庆,裴雪涛. 中国修复重建外科杂志. 2008(02)
本文编号：3566481
【文章来源】：军事医学. 2020,44(03)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
hUC‐MSCsUC‐MSCs复合胶原支架治疗3周后创面愈合率分析
军事医学2020年3月第44卷第3期MilMedSci，Vol44，No3，Mar，2020图4hUC‐MSCsUC‐MSCs复合胶原支架治疗3周后创面愈合率分析（n=3）22.3组织学观察HE染色结果显示，治疗3周后，对照组可见大量炎性细胞浸润，未见表皮层形成（图5A，B）；而实验组创面再表皮化速度较对照组明显提高，具有良好的表皮结构（图5C，D）。治疗6周后，两组创面均已完成再表皮化，对照组表皮厚度不均一，表皮基底层平坦（图5E，F）；实验组修复状况良好，表皮层结构完整，可明显区分基底层、棘层、颗粒层和角质层，可见与正常皮肤组织相似的表皮钉突及真皮乳头结构，真皮层可见排列成束的胶原纤维（图5G，H）。图2hUC‐MSCsUC‐MSCs表面标志蛋白的流式细胞仪鉴定图3hUC‐MSCsUC‐MSCs复合胶原支架治疗3周后创面大体观察（黄色虚线指示创面区域）A.治疗前；B.对照组；C.实验组图5hUC‐MSCsUC‐MSCs复合胶原支架治疗3和6周后创面组织HE染色观察（A，C，E，G：scalebar=100μm；B，D，F，H：scalebar=25μm）A，B.对照组治疗3周；C，D.实验组治疗3周；E，F.对照组治疗6周；G，H.实验组治疗6周195
，Ki67抗体1∶200稀释），4℃孵育过夜，按试剂盒说明进行显色；然后用苏木素衬染细胞核后进行脱水处理，经中性树脂封片后观察。11.4统计学分析利用GraphPadPrism7软件进行数据分析，数据以xˉ±s表示。组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果22.1人脐带来源间充质干细胞培养及鉴定hUCMSCs在无血清培养体系下呈贴壁状态生长，培养10代以内的细胞增殖速度较快。倒置相差显微镜下观察，hUCMSCs胞体呈梭形，细胞密度高时呈漩涡状排列（图1）。图1hUUC‐MSCsC‐MSCs形态观察（scalebar=200μm）流式细胞分析显示，第3代细胞的基质细胞抗原CD105、CD90、CD73的表达阳性率分别为99.9%、100.0%及98.1%，而造血细胞表面抗原CD34、CD45、CD14、CD19、HLADR的表达均呈阴性（阳性率≤2%），符合MSCs的免疫表型特征（图2）。22.2小型猪皮肤大体观察及创面愈合率分析对实验动物进行6周连续观察。结果显示，单纯胶原支架组（对照组）与hUCMSCs复合胶原支架组（实验组）动物生存状态良好，体温正常，创面及周边区域均未出现红肿、感染、皮疹或其他急性过敏反应。初步表明，负载hUCMSCs的胶原支架免疫原性较低，具备一定的应用安全性。治疗3周后，对照组创面瘢痕挛缩明显，大部分区域形成褐色血痂，痂皮较厚且质地坚硬（图3B）；实验组创面修复效果显著改善，创面边缘区域缺损已基本愈合，皮肤具有一定弹性，创面中央区域仍有少量血痂（图3C）。对治疗3周后两组的创面面积进行分析，实验组创面面积较对照组明显缩小，两组创面愈合率分别为对照组（73.79±5.73）%，实验
【参考文献】：
期刊论文
[1]胶原-纤维蛋白胶膜复合脐带间充质干细胞修复小鼠全层皮肤创面的实验研究[J]. 南文滨,陈红丽,刘瑞,徐志浩,原志庆. 中华损伤与修复杂志(电子版). 2015(01)
[2]自体BMSCs复合胶原膜修复猪全层皮肤缺损[J]. 何丽娟,刘大庆,白慈贤,闫迎军,管利东,裴雪涛. 中国修复重建外科杂志. 2009(03)
[3]生物支架材料胶原膜交联前后的特性分析[J]. 陈琳,吕洋,管利东,王韫芳,何丽娟,李艳华,白慈贤,刘大庆,裴雪涛. 中国修复重建外科杂志. 2008(02)
本文编号：3566481
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