基于原子力显微术对B淋巴细胞形貌结构及生物力学研究

发布时间：2022-01-06 23:37

　　本文基于原子力显微镜,结合量子点标记技术、激光扫描共聚焦显微镜以及流式细胞仪等生物检测技术和密度梯度离心法、阳性和阴性磁珠分选法等分离方法,以正常健康人和慢性淋巴白血病患者的外周血B淋巴细胞作为研究对象,在高分辨的纳米尺度下从不同角度研究这两种细胞的生物物理特性,即细胞形态及膜纳米结构、膜表面粘附特性、杨氏模量、抗原-抗体之间特异性相互作用力、膜表面抗原分子的分布情况等。主要获得了以下具有创新性的成果：1)与正常B淋巴细胞相比,慢性淋巴白血病B淋巴细胞高大,膜表面纳米结构更加粗糙,非特异性粘附力和硬度都明显减小。通过修饰CD20抗体的AFM针尖测出CD20抗原-抗体的相互作用力比未修饰抗体针尖测得的非特异性粘附力大5倍,并依据抗原抗体特异性作用力的测量,得出CD20分子在正常CD20+B淋巴细胞膜上分布比较均匀,小部分有聚集现象,相反,在慢淋CD20+B淋巴细胞膜表面分布稀疏。表明应用AFM可在形态学和机械性能上明显区分正常和慢性淋巴白血病B淋巴细胞,为临床诊断慢性淋巴白血病提供新的手段,B淋巴细胞上的CD20分布可以作为抗原CD20用药选择参考。2)随着超抗原SAC刺激时间增加,1.... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
第一章 绪论
    第一节 原子力显微镜简介
        1.1 原子力显微镜的山来
        1.2 原子力显微镜的基本原理
        1.3 原子力显微镜的工作模式
    第二节 在原子力显微镜在细胞成像方面的应用
        2.1 研究单细胞的意义
        2.2 单细胞成像
    第三节 AFM单分子力谱测量在细胞方面的应用
        3.1 测定细胞粘附力和弹性
        3.2 单分子力谱在细胞特异性分子相互作用中的应用
    展望
    研究创新点和意义
    参考文献
第二章 原子力显微镜探测人正常和慢淋B淋巴细胞
    1 引言
    2 试剂材料与方法
        2.1 试剂材料
        2.2 仪器
        2.3 细胞样品制备
        2.4 AFM样品制备
        2.5 原子力显微镜扫描
        2.6 数据统计
    3 结果与讨论
        3.1 原了力显微镜对正常和慢淋B淋巴细胞的形貌与膜纳米结构的表征
        3.2 原了力显微镜测定正常和慢淋B淋巴细咆的力学性质
        3.3 正常和慢性淋巴白血病B淋巴细胞的杨氏模量分析
    小章小结
    参考文献
第三章 B淋巴细胞膜CD20抗原的分布与单分子力谱探测
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 试剂和仪器
        2.2 方法
    3 结果与讨论
        3.1 正常和B-CLL外周血CD20~+B淋巴细胞的荧光成像
        3.2 正常和B-CLL外周血CD20~+B淋巴细胞形态及CD20抗原-抗体特异性相互作用力的AFM分析
    本章小结
    参考文献
第四章 SAC刺激慢性淋巴白血病B淋巴细胞的原子力观察
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 材料和仪器
        2.2 细胞分离培养
        2.3 AFM样品制备
        2.4 增殖实验
        2.5 原子力显微镜成像及力谱测定
        2.6 数据统计
    3 结果与分析
        3.1 CCK-8细胞增殖实验
        3.2 刺激细胞形貌分析
        3.3 刺激B淋巴细胞超微结构分析
        3.4 B淋巴细胞膜纳米力学性能测量
    4 讨论
    本章小结
    参考文献
第五章 有丝分裂原诱导的B淋巴细胞形貌及生物力学分析
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 材料
        2.2 细胞培养
        2.3 纯化B淋巴细胞
        2.4 扫描激光共聚焦显微镜
        2.5 细胞染色和流式细胞分析
        2.6 原子力显微镜成像及力学测定
        2.7 数据统计
    3 结果与讨论
        3.1 倒置荧光显微镜观察B淋巴细胞
        3.2 抗原诱导B淋巴细胞活化
        3.3 细胞周期检测
        3.4 细胞内钙离子浓度检测
        3.5 静息和活化B淋巴细胞形貌和纳米结构变化
        3.6 活化B淋巴细胞的粘附力变化
        3.7 细胞骨架蛋白F-actin检测
        3.8 细胞膜电位检测
    本章总结
    参考文献
附录1 英文缩略语表
附录2 攻读硕士学位期问参加科研工作基本情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]重组质粒pIRES-EGFP-BCL 11B电转染幼稚T细胞的可视化研究[J]. 龚超群,郜世隽,蔡继业,王秋兰.  分析测试学报. 2009(12)
[2]原子力显微镜对中性粒细胞与K562细胞超微结构及机械性能的探测[J]. 黄训,金花,赵宏霞,伍时县,蔡继业.  分析测试学报. 2009(11)
[3]基于原子力显微镜的人外周血CD8+T细胞形貌观察与力谱分析[J]. 黄飞程,郜世隽,邱思远,蔡继业.  分析测试学报. 2009(10)
[4]应用原子力显微镜分析正常淋巴细胞和Jurkat细胞的形态和机械性质[J]. 蔡小芳,蔡继业,董世松,邓华,胡明铅.  生物工程学报. 2009(07)
[5]单细胞结构与功能的原子力显微镜研究[J]. 朱杰,孙润广.  生命科学仪器. 2005(02)



本文编号：3573372