新型磷酸钙复合骨水泥对大鼠骨髓间充质干细胞生物相容性及成骨分化的研究
发布时间：2022-01-13 19:54
目的:研究新型磷酸钙复合骨水泥（磷酸钙骨水泥/骨基质明胶、磷酸钙骨水泥/骨基质明胶+聚乳酸-羟基乙酸共聚物空白微球）对大鼠骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cell,BMSCs）的体外骨诱导活性及细胞毒性。以期获得一种适合骨缺损修复的新型人工复合骨水泥,尤其能够作为骨质疏松压缩性骨折的骨修复材料。方法:1.通过W/O/W微球制备法自制聚乳酸-羟基乙酸共聚物空白微球（PLGA空白微球）,称重分装并紫外线灭菌备用,按特定比例加入复合骨水泥;采用Urist等方法利用兔四肢长骨干经粉碎、脱脂脱钙等处理后制得骨基质明胶骨粉（BMG）,将骨基质明胶骨粉称重分装并环氧乙烷灭菌备用。2.依据前期实验结果,在磷酸钙骨水泥（CPC）与骨基质明胶骨粉按5:1混合的基础上再按总重量的5%加入PLGA空白微球,再与固化液均匀搅拌,注射进预制的塑料模具制成圆柱状的新型磷酸钙复合骨水泥,同理制得单纯的CPC组、及不含微球的复合骨水泥组,并通过完全培养基的浸泡后制成三组材料的浸提液。3.选用3周龄左右体重在80-100g的SD大鼠,在分离大鼠骨髓间充质干细胞时采用全骨髓贴壁培养法,通过三次...
【文章来源】：西南医科大学四川省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
瑞邦骨肽及塑料模具ABC
图 2 制备的实验原材料及复合骨水泥Figure 2 The raw material and different kinds of artificial composite calcium phosphate bonecement.A 为经过环氧乙烷灭菌处理的骨基质明胶，呈现淡黄色；B 是经 W/O/W 微球制备法自制的 PLGA 空白微球，呈白色粉末状；C 脱模后的圆柱状各型骨水泥。4 主要试剂盒碱性磷酸酶测定试剂盒（南京建成生物制品公司）、CCK8 细胞毒性增殖试剂盒（500T，东仁化学生物制品公司）、茜素红染液（sigma 公司）5 实验方法5.1 实验组各型骨水泥浸提液的制备由于骨水泥不能溶于水，对后期相关指标的测量带来障碍，故浸提液
结 果. 大鼠骨髓间充质干细胞生长情况原代骨髓间充质干细胞一般在接种后数小时后便开始贴壁，形态尚不均一，可呈纺锤形、梭形甚至多角形。接种后 2-3 天换液一次，换液过程使用1%的PBS液冲洗3次，此过程也可不断纯化骨髓间充质干细胞将一些无贴壁性质的骨髓细胞除去，通常原代细胞生长缓慢。经传代后的骨髓间充质干细胞生长活跃，5-7 天即可铺满瓶底，多为长梭形，形态均一，细胞团可呈旋涡状生长，实验所用即是 P3 代细胞（见图 3）
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国近5年来骨质疏松症流行病学研究现状[J]. 白璧辉,谢兴文,李鼎鹏,许伟,李宁,潘鑫戊. 中国骨质疏松杂志. 2018(02)
[2]骨质疏松性椎体压缩性骨折研究进展[J]. 居正烨,陈圣宝,张长青. 国际骨科学杂志. 2018(01)
[3]载万古霉素磷酸钙骨水泥一期植入治疗慢性骨髓炎的疗效观察[J]. 郎志刚,袁峰,梁玉祥,喻杉. 华西医学. 2017(12)
[4]γ-聚谷氨酸/壳聚糖复合磷酸钙骨水泥制备、表征及性能[J]. 疏秀林,施庆珊,陈铭杰,冯劲. 中国组织工程研究. 2017(26)
[5]载药抗结核人工骨的研究现状[J]. 桂钱欢,李波. 广东医学. 2016(24)
[6]miR-195对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响[J]. 宋鹏,荆凯,薛建华,魏鹏飞. 中国组织工程研究. 2016(45)
[7]“温肾通络止痛方”治疗原发性骨质疏松症的疗效观察及处方优化[J]. 郑苏阳,马勇,郭杨,董维,范竞,黄桂成. 辽宁中医杂志. 2016(10)
[8]氯化锂复合磷酸钙骨水泥可促进大鼠胫骨骨缺损修复[J]. 李理,覃永保,马刚,李兵. 南方医科大学学报. 2016(06)
[9]N-乙酰半胱氨酸丝素微球复合磷酸钙骨水泥的制备及表征[J]. 姜磊,皮斌,冯焘,李斌,陆英杰,杨惠林,朱雪松. 中国组织工程研究. 2016(16)
[10]新型氯化锂复合磷酸钙骨水泥的理化性能及成骨特性[J]. 李理,李百川,王仁崇,李兵. 中国组织工程研究. 2016(03)
博士论文
[1]骨髓基质干细胞体内成骨分化研究[D]. 吴江群.中国协和医科大学 2008
硕士论文
[1]新型磷酸钙复合骨水泥的制备及性能研究[D]. 丁裕明.西南医科大学 2016
[2]α-半水硫酸钙的制备及其作为载药骨水泥体系的体外释放研究[D]. 张丹.四川大学 2007
本文编号：3587048
【文章来源】：西南医科大学四川省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
瑞邦骨肽及塑料模具ABC
图 2 制备的实验原材料及复合骨水泥Figure 2 The raw material and different kinds of artificial composite calcium phosphate bonecement.A 为经过环氧乙烷灭菌处理的骨基质明胶，呈现淡黄色；B 是经 W/O/W 微球制备法自制的 PLGA 空白微球，呈白色粉末状；C 脱模后的圆柱状各型骨水泥。4 主要试剂盒碱性磷酸酶测定试剂盒（南京建成生物制品公司）、CCK8 细胞毒性增殖试剂盒（500T，东仁化学生物制品公司）、茜素红染液（sigma 公司）5 实验方法5.1 实验组各型骨水泥浸提液的制备由于骨水泥不能溶于水，对后期相关指标的测量带来障碍，故浸提液
结 果. 大鼠骨髓间充质干细胞生长情况原代骨髓间充质干细胞一般在接种后数小时后便开始贴壁，形态尚不均一，可呈纺锤形、梭形甚至多角形。接种后 2-3 天换液一次，换液过程使用1%的PBS液冲洗3次，此过程也可不断纯化骨髓间充质干细胞将一些无贴壁性质的骨髓细胞除去，通常原代细胞生长缓慢。经传代后的骨髓间充质干细胞生长活跃，5-7 天即可铺满瓶底，多为长梭形，形态均一，细胞团可呈旋涡状生长，实验所用即是 P3 代细胞（见图 3）
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国近5年来骨质疏松症流行病学研究现状[J]. 白璧辉,谢兴文,李鼎鹏,许伟,李宁,潘鑫戊. 中国骨质疏松杂志. 2018(02)
[2]骨质疏松性椎体压缩性骨折研究进展[J]. 居正烨,陈圣宝,张长青. 国际骨科学杂志. 2018(01)
[3]载万古霉素磷酸钙骨水泥一期植入治疗慢性骨髓炎的疗效观察[J]. 郎志刚,袁峰,梁玉祥,喻杉. 华西医学. 2017(12)
[4]γ-聚谷氨酸/壳聚糖复合磷酸钙骨水泥制备、表征及性能[J]. 疏秀林,施庆珊,陈铭杰,冯劲. 中国组织工程研究. 2017(26)
[5]载药抗结核人工骨的研究现状[J]. 桂钱欢,李波. 广东医学. 2016(24)
[6]miR-195对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响[J]. 宋鹏,荆凯,薛建华,魏鹏飞. 中国组织工程研究. 2016(45)
[7]“温肾通络止痛方”治疗原发性骨质疏松症的疗效观察及处方优化[J]. 郑苏阳,马勇,郭杨,董维,范竞,黄桂成. 辽宁中医杂志. 2016(10)
[8]氯化锂复合磷酸钙骨水泥可促进大鼠胫骨骨缺损修复[J]. 李理,覃永保,马刚,李兵. 南方医科大学学报. 2016(06)
[9]N-乙酰半胱氨酸丝素微球复合磷酸钙骨水泥的制备及表征[J]. 姜磊,皮斌,冯焘,李斌,陆英杰,杨惠林,朱雪松. 中国组织工程研究. 2016(16)
[10]新型氯化锂复合磷酸钙骨水泥的理化性能及成骨特性[J]. 李理,李百川,王仁崇,李兵. 中国组织工程研究. 2016(03)
博士论文
[1]骨髓基质干细胞体内成骨分化研究[D]. 吴江群.中国协和医科大学 2008
硕士论文
[1]新型磷酸钙复合骨水泥的制备及性能研究[D]. 丁裕明.西南医科大学 2016
[2]α-半水硫酸钙的制备及其作为载药骨水泥体系的体外释放研究[D]. 张丹.四川大学 2007
本文编号：3587048
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