噬菌体展示肽库筛选人成骨细胞特异性结合多肽的实验研究
发布时间：2022-01-15 15:04
以纯化的人颅骨成骨细胞为阳性靶细胞，从噬菌体展示十二肽库中筛选出能够与之特异性结合的多肽，为钛种植体表面的生物化修饰提供新的策略和研究方向。本研究一共包含两个部分：第一部分:噬菌体展示十二肽库筛选人成骨细胞特异性多肽的实验研究以人颅骨成骨细胞作为靶细胞，对噬菌体展示十二肽库进行全细胞筛选，洗涤后将获得的细胞洗脱液和细胞裂解液分别培养计数，经四轮筛选后，从计数平板中随机挑选46个（洗脱、裂解各23个）分离良好的噬菌体克隆，以人牙龈成纤维细胞为对照细胞进行细胞ELISA检测、细胞免疫荧光等鉴定阳性噬菌体克隆并测序分析。结果显示：共得到22个与成骨细胞特异性结合力高于成纤维细胞2倍以上的阳性克隆，氨基酸序列具有同源性。洗脱、裂解液中获得了共同的特异性结合多肽，比例相当，占有相近的结合优势，这也说明与成骨细胞具有高度亲和力的噬菌体是通过其表面展示的短肽与细胞特异性结合，而能够内化入细胞胞浆内的噬菌体也是通过这种受体介导的胞吞作用进行的。出现频率最高的多肽氨基酸序列为：M G W S W W P E T W P M，对该多肽序列的氨基酸组成特点及其基本的生化特性进行分析。第二部分：噬菌体展示十二...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词表
摘要
Abstract
前言
材料与方法
第一部分 材料与试剂
1. 材料与试剂
2. 仪器与设备
3. 试剂的配置方法
第二部分 实验方法
1. 细胞培养
2. 噬菌体展示肽库筛选人成骨细胞特异性多肽的实验研究
2.1 技术路线
2.2 筛选方法
2.3 检测分析
2.4 结果
3 噬菌体展示肽库差减筛选人成骨细胞特异性多肽的实验研究
3.1 技术路线
3.2 筛选方法
3.3 检测分析
3.4 结果
讨论
参考文献
个人简历
致谢
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]MUC1模拟表位肽对表达人MUC1 T739小鼠膀胱癌细胞的细胞毒作用的实验研究[J]. 崔志刚,刘刚,裘辉,潘进勇,路浩军,张立新. 中华临床医师杂志(电子版). 2012(02)
[2]钛表面固定特异性识别内皮祖细胞的多肽适配子[J]. 陈卓玥,李全利,赵元聪,陈佳龙,游天雪,熊开琴,黄楠. 高等学校化学学报. 2011(01)
[3]噬菌体随机肽库筛选肝癌细胞特异性结合肽的实验研究[J]. 杨璞,何剪太,王吉伟,胡玉,于丽,金鑫,张阳德. 南方医科大学学报. 2009(09)
[4]A novel peptide, selected from phage display library of random peptides, can efficiently target into human breast cancer cell[J]. DONG Jian1, LIU WeiQing1, JIANG AiMei1, ZHANG KeJian2 & CHEN MingQing1 1 Biotherapy Center, First Affiliated Hospital, Kunming Medical College, Kunming 650032, China 2 Tumor Center, Department of Biology, University of Cincinnati, Cincinnati 45221, USA. Chinese Science Bulletin. 2008(06)
[5]体外诱导家猪骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化[J]. 邹立津,吕农华,冯文周,邹学农. 中国修复重建外科杂志. 2007(11)
[6]他克莫司诱导的骨髓间充质干细胞成骨细胞分化和体内骨形成[J]. 董健,戴文达,方涛林,林红,Toshimasa Uemura. 中华医学杂志. 2007(03)
[7]T4、φχ174D和f2三种噬菌体对戊二醛消毒剂抵抗力的比较研究[J]. 陈昭斌,张朝武,许欣,朱敏,王国庆. 四川大学学报(医学版). 2006(02)
[8]Effect of type I collagen on the adhesion, proliferation, and osteoblastic gene expression of bone marrow-derived mesenchymal stem cells[J]. 刘刚,胡蕴玉,赵建宁,吴苏稼,熊卓,吕荣. Chinese Journal of Traumatology. 2004(06)
[9]噬菌体展示技术的发展及应用[J]. 高学良,钱旻,赵群飞. 生命的化学. 2001(05)
[10]一种碘化钾提取外周血基因组DNA的方法[J]. 赵书平,张俊洁,尤建,杨玉红,郭峰. 中华医学遗传学杂志. 1999(06)
本文编号：3590827
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词表
摘要
Abstract
前言
材料与方法
第一部分 材料与试剂
1. 材料与试剂
2. 仪器与设备
3. 试剂的配置方法
第二部分 实验方法
1. 细胞培养
2. 噬菌体展示肽库筛选人成骨细胞特异性多肽的实验研究
2.1 技术路线
2.2 筛选方法
2.3 检测分析
2.4 结果
3 噬菌体展示肽库差减筛选人成骨细胞特异性多肽的实验研究
3.1 技术路线
3.2 筛选方法
3.3 检测分析
3.4 结果
讨论
参考文献
个人简历
致谢
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]MUC1模拟表位肽对表达人MUC1 T739小鼠膀胱癌细胞的细胞毒作用的实验研究[J]. 崔志刚,刘刚,裘辉,潘进勇,路浩军,张立新. 中华临床医师杂志(电子版). 2012(02)
[2]钛表面固定特异性识别内皮祖细胞的多肽适配子[J]. 陈卓玥,李全利,赵元聪,陈佳龙,游天雪,熊开琴,黄楠. 高等学校化学学报. 2011(01)
[3]噬菌体随机肽库筛选肝癌细胞特异性结合肽的实验研究[J]. 杨璞,何剪太,王吉伟,胡玉,于丽,金鑫,张阳德. 南方医科大学学报. 2009(09)
[4]A novel peptide, selected from phage display library of random peptides, can efficiently target into human breast cancer cell[J]. DONG Jian1, LIU WeiQing1, JIANG AiMei1, ZHANG KeJian2 & CHEN MingQing1 1 Biotherapy Center, First Affiliated Hospital, Kunming Medical College, Kunming 650032, China 2 Tumor Center, Department of Biology, University of Cincinnati, Cincinnati 45221, USA. Chinese Science Bulletin. 2008(06)
[5]体外诱导家猪骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化[J]. 邹立津,吕农华,冯文周,邹学农. 中国修复重建外科杂志. 2007(11)
[6]他克莫司诱导的骨髓间充质干细胞成骨细胞分化和体内骨形成[J]. 董健,戴文达,方涛林,林红,Toshimasa Uemura. 中华医学杂志. 2007(03)
[7]T4、φχ174D和f2三种噬菌体对戊二醛消毒剂抵抗力的比较研究[J]. 陈昭斌,张朝武,许欣,朱敏,王国庆. 四川大学学报(医学版). 2006(02)
[8]Effect of type I collagen on the adhesion, proliferation, and osteoblastic gene expression of bone marrow-derived mesenchymal stem cells[J]. 刘刚,胡蕴玉,赵建宁,吴苏稼,熊卓,吕荣. Chinese Journal of Traumatology. 2004(06)
[9]噬菌体展示技术的发展及应用[J]. 高学良,钱旻,赵群飞. 生命的化学. 2001(05)
[10]一种碘化钾提取外周血基因组DNA的方法[J]. 赵书平,张俊洁,尤建,杨玉红,郭峰. 中华医学遗传学杂志. 1999(06)
本文编号：3590827
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/swyx/3590827.html
