类弹性蛋白融合止血肽RADA-16的止血性能研究
发布时间：2022-01-22 20:17
不可控出血是造成战伤死亡、意外死亡和外科手术死亡的重要原因,理想的止血材料对减少出血致死十分重要。自组装多肽RADA-16（RADARADARADARADA）是化学合成的一种小肽。1%的RADA-16溶液（w/v）接触出血创面后,迅速自组装成网状纳米纤维屏障,可在15s内终止成年仓鼠脑、脊髓、股动脉、肝等部位的创伤出血。已被美国麻省理工学院下属公司开发为止血产品。由于来源依赖合成,纯化困难,价格昂贵,目前仅用于脑外科手术,应用范围和受惠人群极大受限。解决该问题的关键在于降低RADA-16的生产成本。基因工程菌发酵是目前低成本获取药用蛋白的首选方法。但是,RADA-16相对而言分子量偏低,稳定性太差而难以获得理想的表达水平。因此提高RADA-16在宿主细胞中的稳定性是实现基因工程法生产RADA-16的关键,而将RADA-16与其他蛋白融合表达有利于提高其表达产物稳定性。类弹性蛋白是基于天然牛弹性蛋白序列中高频出现的短小重复序列VPGXG（X是Pro以外的任何一种氨基酸）,利用过基因重组技术得到的一种多肽,具有天然弹性蛋白的部分活性,已被应用于细胞培养、组织修复、药物缓释和标签纯化蛋白。本...
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ITC纯化示意图
图 3 pMD19-T-hELP36R 的 BamHI & XhoI 双酶切检测结果图 3 附注：M：DL5000；1：pMD19-T-hELP36 酶切产物；2-5：1，2，3，4 号 pMD19-T-hELP36R酶切产物；6-9：1，2，3，4 号 pMD19-T-hELP36R 质粒 DNA。从图 3 可以看出，经 BamHI & XhoI 双酶切处理，pMD19-T-hELP36 被水解成单的一条带，来自 4 个转化克隆的重组质粒被 BamHI & XhoI 双酶切后，均被水解成片段，其中一个片段与 pMD19-T-hELP36 水解产物大小一致，另外一个片段很小，近 100bp，而该片段在相同上样量的 pMD19-T-hELP36 质粒 DNA 样品中并未出现见图 3），初步说明 RADA16 编码基因插入到 pMD19-T-hELP36 的 BamHI 与 XhoI点之间，该结果经随后的序列分析得到了进一步确证（见图 4）。
mHI & XhoI 双酶切处理，pMD隆的重组质粒被 BamHI & XhMD19-T-hELP36 水解产物大小一上样量的 pMD19-T-hELP36 质16 编码基因插入到 pMD19-T-h列分析得到了进一步确证（见pMD19-T-hELP36-RADA16 序列测定 的构建
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型止血材料纤维蛋白贴的止血作用研究[J]. 黄远铿,肖百全,欧慧瑜,韩重,杨威. 中国药理学通报. 2013(08)
[2]纤溶酶系统在成肌纤维细胞凋亡、组织纤维化过程中的作用[J]. 宋辉,王明席,许瑞安. 中国药理学通报. 2012(06)
[3]新型止血材料SURGICELTM和明胶海绵在神经外科手术中的应用（英文）[J]. 霍雷,阮文华,丁志良,成之奇,吴刚. 中国组织工程研究. 2012(03)
[4]生物医用可吸收止血材料的研究与临床应用[J]. 汪向飞,张晓丹,周汉新. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(21)
[5]战创伤止血敷料的现状及展望[J]. 张平,肖南,张治纲,李曙光. 创伤外科杂志. 2009(04)
[6]眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A抗血小板聚集作用及机制[J]. 王彩娥,孙黔云,李敏,石京山. 中国药理学通报. 2009(06)
[7]战创伤快速止血材料及其临床应用[J]. 田浩,吴良平,张玉新. 临床军医杂志. 2008(06)
[8]伤口止血材料研究进展[J]. 张德兴,何忠杰. 中国急救医学. 2005(05)
[9]藻酸钙敷料用于鼻内填塞的效果观察[J]. 方美珍,兰龙江. 护理研究. 2004(06)
[10]Sorbalgon藻酸钙敷料用于鼻内填塞效果观察[J]. 方美珍,兰龙江. 临床医学. 2004(01)
本文编号：3602835
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ITC纯化示意图
图 3 pMD19-T-hELP36R 的 BamHI & XhoI 双酶切检测结果图 3 附注：M：DL5000；1：pMD19-T-hELP36 酶切产物；2-5：1，2，3，4 号 pMD19-T-hELP36R酶切产物；6-9：1，2，3，4 号 pMD19-T-hELP36R 质粒 DNA。从图 3 可以看出，经 BamHI & XhoI 双酶切处理，pMD19-T-hELP36 被水解成单的一条带，来自 4 个转化克隆的重组质粒被 BamHI & XhoI 双酶切后，均被水解成片段，其中一个片段与 pMD19-T-hELP36 水解产物大小一致，另外一个片段很小，近 100bp，而该片段在相同上样量的 pMD19-T-hELP36 质粒 DNA 样品中并未出现见图 3），初步说明 RADA16 编码基因插入到 pMD19-T-hELP36 的 BamHI 与 XhoI点之间，该结果经随后的序列分析得到了进一步确证（见图 4）。
mHI & XhoI 双酶切处理，pMD隆的重组质粒被 BamHI & XhMD19-T-hELP36 水解产物大小一上样量的 pMD19-T-hELP36 质16 编码基因插入到 pMD19-T-h列分析得到了进一步确证（见pMD19-T-hELP36-RADA16 序列测定 的构建
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型止血材料纤维蛋白贴的止血作用研究[J]. 黄远铿,肖百全,欧慧瑜,韩重,杨威. 中国药理学通报. 2013(08)
[2]纤溶酶系统在成肌纤维细胞凋亡、组织纤维化过程中的作用[J]. 宋辉,王明席,许瑞安. 中国药理学通报. 2012(06)
[3]新型止血材料SURGICELTM和明胶海绵在神经外科手术中的应用（英文）[J]. 霍雷,阮文华,丁志良,成之奇,吴刚. 中国组织工程研究. 2012(03)
[4]生物医用可吸收止血材料的研究与临床应用[J]. 汪向飞,张晓丹,周汉新. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(21)
[5]战创伤止血敷料的现状及展望[J]. 张平,肖南,张治纲,李曙光. 创伤外科杂志. 2009(04)
[6]眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A抗血小板聚集作用及机制[J]. 王彩娥,孙黔云,李敏,石京山. 中国药理学通报. 2009(06)
[7]战创伤快速止血材料及其临床应用[J]. 田浩,吴良平,张玉新. 临床军医杂志. 2008(06)
[8]伤口止血材料研究进展[J]. 张德兴,何忠杰. 中国急救医学. 2005(05)
[9]藻酸钙敷料用于鼻内填塞的效果观察[J]. 方美珍,兰龙江. 护理研究. 2004(06)
[10]Sorbalgon藻酸钙敷料用于鼻内填塞效果观察[J]. 方美珍,兰龙江. 临床医学. 2004(01)
本文编号：3602835
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/swyx/3602835.html
