EGF修饰同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维气管支架生物学性能研究
发布时间：2022-04-25 20:07
气管外伤、气管狭窄、气管肿瘤严重损伤正常通气功能,引起组织缺氧,危及生命。气管病变切除重建是治疗这些疾病的最为有效的方法。但是,长段气管切除重建,目前临床仍无安全可靠的方法。组织工程气管是有可能成为解决长段气管缺损的可能方案。因此,气管替代材料的研究,寻找合适的气管替代材料,成为本领域研究的热点问题。可以说,组织工程气管可以在结构和功能上完整重建气管,是最理想,也是最有应用前景的气管替代材料。同轴纺丝是以经典纺丝为基础,通过双层同轴电纺针头,改进同轴电纺工艺后发展而来的新的电纺技术。同轴电纺的独特结构,使能够将不宜电纺的药物等应用于电纺,在生物、医学、药学等方面具前景巨大。同轴电纺组织工程材料的高微观表面积促进种子细胞粘附,高孔隙率给种子细胞粘附提供足够空间。聚己内酯（Polycaprolactone,PCL）和胶原（collagen,Col）是两种常用生物降解材料,在体内有一定的降解率,随着组织工程气管细胞化进程,聚己内酯和胶原逐渐降解。EGF能够促进间质和上皮粘附、增殖和分化等。EGF能够促进肺泡I型上皮分化,增加肺泡表面活性物质相关蛋白A。移植物上皮转化移植是制约移植成功的关键因...
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言
文献回顾
1 气管移植手术研究进展
1.1 同种异体气管移植
1.2 自体组织替代气管移植
1.3 自体主动脉瓣气管替代物移植
1.4 人工气管移植
2 常见组织工程气管支架
2.1 同种脱细胞气管支架
2.2 小儿脱细胞同种异体气管支架
2.3 尸体来源的脱细胞气管支架移植
2.4 异种脱细胞气管支架
2.5 预血管化气管支架
2.6 POSS-PCU组织工程气管支架
2.7 3D打印气管支架
3 组织工程气管种子细胞
3.1 干细胞
3.2 软骨细胞
3.3 气管上皮细胞
3.4 间充质细胞
4 组织工程气管需解决的关键问题
4.1 气道上皮形成
4.2 支架组织再血管化
4.3 生物反应器
4.4 支架材料
4.4.1 可降解材料
4.4.2 胶原
4.4.3 聚己内酯
5 静电纺丝在组织工程气管中的应用
5.1 静电纺丝的发现
5.2 静电纺丝的现状
5.3 静电纺丝的影响因素
5.4 同轴电纺技术
6 前期研究成果和展望
6.1 前期成果
6.2 研究基础
6.3 展望
第一部分 同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维制备
1 材料
1.1 实验试剂和耗材
1.2 实验设备
1.3 种子细胞培养
2 方法
2.1 纳米纤维制备
2.2 表征观察
2.3 孔隙率测试检测
2.4 组织兼容性检测
2.5 细胞毒性检测
3 结果
3.1 扫描电镜观察(SEM)
3.2 孔隙率测试检测
3.3 同轴电纺不同胶原比例的纳米纤维支架组织兼容性检测
3.4 同轴电纺不同胶原比例的纳米纤维支架的hMSCs细胞毒性试验
4 讨论
第二部分 EGF修饰同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维气管支架建立
1 材料
1.1 实验试剂和耗材
1.2 实验设备
1.3 种子细胞培养
2 方法
2.1 EGF修饰同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维膜制备
2.2 扫描电镜观察(SEM)
2.3 孔隙率测试检测
2.4 EGF释放实验
2.5 酶联免疫吸附法检测EGF浓度
3 结果
3.1 SEM观察EGF修饰支架
3.2 两种支架的直径比较
3.3 孔隙率测试检测
3.4 EGF释放实验
4 讨论
第三部分 同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维气管支架机械性能
1 材料
1.1 实验对象
1.2 实验试剂和耗材
1.3 实验设备
2 方法
2.1 水成角检测
2.2 力学检测
2.3 支架降解实验
2.4 SEM观察同轴电纺PC纳米纤维支架的降解实验
3 结果
3.1 水成角检测
3.2 拉伸实验
3.3 支架降解实验
3.4 SEM观察同轴电纺PC纳米纤维支架的降解实验
4 讨论
第四部分 EGF修饰同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维气管支架生物学性能
1 材料
1.1 实验材料和耗材
1.2 实验对象
1.3 种子细胞培养
1.4 实验设备
2 方法
2.1 骨髓间充质干细胞种植
2.2 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架的hMSCs细胞粘附实验
2.3 SEM观察EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架hMSCs细胞增殖
2.4 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架hMSCs细胞增殖实验
2.5 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架的hMSCs细胞迁移检测
3 结果
3.1 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架的hMSCs细胞粘附实验
3.2 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架的hMSCs细胞增殖实验
3.3 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架的hMSCs细胞增殖实验
3.4 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架材料中hMSCs细胞Transwell迁移情况
4 讨论
第五部分 EGF修饰同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维气管支架诱导上皮分化及机制
1 材料
1.1 实验试剂和耗材
1.2 实验设备
1.3 种子细胞培养
2 方法
2.1 免疫荧光检测EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架促进hMSCs上皮样分子表达
2.2 同轴电纺支架材料上总蛋白的提取
2.3 免疫印迹检测EGF信号通路的激活与表达情况
2.4 免疫印迹检测EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架促进hMSCs上皮转化
3 结果
3.1 激光共聚焦显微镜观察hMSCs在EGF修饰支架上皮样分子表达
3.2 免疫印迹检测EGF信号通路的激活与表达情况
3.3 免疫印迹检测EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架促进hMSCs上皮转化
4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型复合型人工气管移植实验研究[J]. 刘文亮,肖鹏,梁恒星,安然,成刚,喻风雷. 中国修复重建外科杂志. 2013(03)
本文编号：3648257
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言
文献回顾
1 气管移植手术研究进展
1.1 同种异体气管移植
1.2 自体组织替代气管移植
1.3 自体主动脉瓣气管替代物移植
1.4 人工气管移植
2 常见组织工程气管支架
2.1 同种脱细胞气管支架
2.2 小儿脱细胞同种异体气管支架
2.3 尸体来源的脱细胞气管支架移植
2.4 异种脱细胞气管支架
2.5 预血管化气管支架
2.6 POSS-PCU组织工程气管支架
2.7 3D打印气管支架
3 组织工程气管种子细胞
3.1 干细胞
3.2 软骨细胞
3.3 气管上皮细胞
3.4 间充质细胞
4 组织工程气管需解决的关键问题
4.1 气道上皮形成
4.2 支架组织再血管化
4.3 生物反应器
4.4 支架材料
4.4.1 可降解材料
4.4.2 胶原
4.4.3 聚己内酯
5 静电纺丝在组织工程气管中的应用
5.1 静电纺丝的发现
5.2 静电纺丝的现状
5.3 静电纺丝的影响因素
5.4 同轴电纺技术
6 前期研究成果和展望
6.1 前期成果
6.2 研究基础
6.3 展望
第一部分 同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维制备
1 材料
1.1 实验试剂和耗材
1.2 实验设备
1.3 种子细胞培养
2 方法
2.1 纳米纤维制备
2.2 表征观察
2.3 孔隙率测试检测
2.4 组织兼容性检测
2.5 细胞毒性检测
3 结果
3.1 扫描电镜观察(SEM)
3.2 孔隙率测试检测
3.3 同轴电纺不同胶原比例的纳米纤维支架组织兼容性检测
3.4 同轴电纺不同胶原比例的纳米纤维支架的hMSCs细胞毒性试验
4 讨论
第二部分 EGF修饰同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维气管支架建立
1 材料
1.1 实验试剂和耗材
1.2 实验设备
1.3 种子细胞培养
2 方法
2.1 EGF修饰同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维膜制备
2.2 扫描电镜观察(SEM)
2.3 孔隙率测试检测
2.4 EGF释放实验
2.5 酶联免疫吸附法检测EGF浓度
3 结果
3.1 SEM观察EGF修饰支架
3.2 两种支架的直径比较
3.3 孔隙率测试检测
3.4 EGF释放实验
4 讨论
第三部分 同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维气管支架机械性能
1 材料
1.1 实验对象
1.2 实验试剂和耗材
1.3 实验设备
2 方法
2.1 水成角检测
2.2 力学检测
2.3 支架降解实验
2.4 SEM观察同轴电纺PC纳米纤维支架的降解实验
3 结果
3.1 水成角检测
3.2 拉伸实验
3.3 支架降解实验
3.4 SEM观察同轴电纺PC纳米纤维支架的降解实验
4 讨论
第四部分 EGF修饰同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维气管支架生物学性能
1 材料
1.1 实验材料和耗材
1.2 实验对象
1.3 种子细胞培养
1.4 实验设备
2 方法
2.1 骨髓间充质干细胞种植
2.2 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架的hMSCs细胞粘附实验
2.3 SEM观察EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架hMSCs细胞增殖
2.4 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架hMSCs细胞增殖实验
2.5 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架的hMSCs细胞迁移检测
3 结果
3.1 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架的hMSCs细胞粘附实验
3.2 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架的hMSCs细胞增殖实验
3.3 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架的hMSCs细胞增殖实验
3.4 EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架材料中hMSCs细胞Transwell迁移情况
4 讨论
第五部分 EGF修饰同轴电纺聚己内酯/胶原纳米纤维气管支架诱导上皮分化及机制
1 材料
1.1 实验试剂和耗材
1.2 实验设备
1.3 种子细胞培养
2 方法
2.1 免疫荧光检测EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架促进hMSCs上皮样分子表达
2.2 同轴电纺支架材料上总蛋白的提取
2.3 免疫印迹检测EGF信号通路的激活与表达情况
2.4 免疫印迹检测EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架促进hMSCs上皮转化
3 结果
3.1 激光共聚焦显微镜观察hMSCs在EGF修饰支架上皮样分子表达
3.2 免疫印迹检测EGF信号通路的激活与表达情况
3.3 免疫印迹检测EGF修饰同轴电纺纳米纤维支架促进hMSCs上皮转化
4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型复合型人工气管移植实验研究[J]. 刘文亮,肖鹏,梁恒星,安然,成刚,喻风雷. 中国修复重建外科杂志. 2013(03)
本文编号：3648257
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/swyx/3648257.html
