动态力学刺激下血小板裂解液复合国产多孔钽对成骨细胞功能的影响
发布时间：2022-07-09 19:13
目的建立旋转细胞培养系统（Rotary Cell Culture System,RCCS）,探究动态力学刺激下血小板裂解液（Platelet lysate,PL）复合国产多孔钽对成骨细胞相关蛋白表达以及成骨细胞分化的影响。方法1大体和显微镜下观察多孔钽形态特征。2采用反复冻融法制备血小板裂解液,用PL修饰国产多孔钽,并观察细胞-多孔钽复合物生长状态。3 CCK-8法筛选PL最佳体积分数。4实验分组:MG63细胞组（A组）,MG63细胞+多孔钽组（B组）,MG63细胞+多孔钽+动态培养组（C组）,MG63细胞+血小板裂解液+多孔钽组（D组）,MG63细胞+血小板裂解液+多孔钽+动态培养组（E组）。5用ELISA法检测各组细胞成骨因子表达情况。6用Western blot法检测成骨因子表达情况。7检测各组细胞中碱性磷酸酶活性和钙离子含量。8检测动态组和静态组乳酸和葡萄糖含量。结果1多孔钽金属材料为圆片状金属,直径约为1.5cm,厚度约为0.2cm,外观为灰色,呈现金属光泽,表面呈凹凸不平状,可见很多细小颗粒,扫描电镜下观察可见细小颗粒构成的蜂窝状微孔结构,各个孔隙之间相互联通,孔径大小均匀...
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
引言
第1章 实验研究
1.1 材料与方法
1.1.1 实验材料
1.1.2 主要实验试剂
1.1.3 主要实验仪器
1.1.4 主要试剂的配置
1.1.5 多孔钽的大体和微观观察
1.1.6 MG63细胞的培养和鉴定
1.1.7 MG63细胞和多孔钽支架复合培养
1.1.8 鬼笔环肽染色MG63细胞和多孔钽材料复合物
1.1.9 血小板裂解液的制备
1.1.10 CCK-8法筛选血小板裂解液最佳体积分数
1.1.11 血小板裂解液与MG63细胞复合培养
1.1.12 实验分组
1.1.13 ELISA 法检测成骨细胞COL-1、RUNX2、OPN表达情况
1.1.14 Western blot法检测成骨细胞COL-1、RUNX2、OPN表达情况
1.1.15 碱性磷酸酶试剂盒检测ALP活性情况
1.1.16 钙离子检测试剂盒检测钙离子含量情况
1.1.17 动态和静态培养中乳酸/葡萄糖含量情况
1.1.18 统计学分析
1.2 结果
1.2.1 国产多孔钽材料大体和微观结构以及细胞转瓶培养装置
1.2.2 MG63细胞形态学观察
1.2.3 荧光显微镜观察鬼笔环肽染色MG63细胞和多孔钽材料复合
1.2.4 血小板裂解液最佳体积分数筛选
1.2.5 ELISA法检测成骨因子的表达结果
1.2.6 Western blot法检测成骨因子表达结果
1.2.7 碱性磷酸酶活性检测结果
1.2.8 钙离子检测结果
1.2.9 各组细胞乳酸、葡萄糖检测结果
1.3 讨论
1.3.1 MG63细胞与多孔钽共生长情况良好
1.3.2 PL对成骨过程具有增强作用
1.3.3 动态培养和PL对MG63细胞复合多孔钽能增强成骨基因表达
1.3.4 动态培养能够改善细胞培养环境
1.4 小结
参考文献
结论
第2章 综述 基因治疗骨关节炎的研究进展
2.1 关节炎的病理机制
2.2 基因治疗的概念
2.3 基因治疗的策略
2.3.1 软骨损伤相关目的基因的选择
2.3.2 基因治疗的靶细胞
2.3.3 导入基因的表达载体
2.3.4 基因的递送方式
2.4 基因的组合治疗和RNA技术
2.5 总结与展望
参考文献
致谢
在学期间研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]骨组织工程多孔生物支架设计研究进展[J]. 屈华伟,韩振宇,卓越,富宏亚. 机械工程学报. 2019(15)
[2]多孔金属骨组织支架的研究进展[J]. 杨伽捷,朱裕昌,杨春喜. 实用骨科杂志. 2018(02)
[3]TGF-β and BMP signaling in osteoblast,skeletal development,and bone formation,homeostasis and disease[J]. Mengrui Wu,Guiqian Chen,Yi-Ping Li. Bone Research. 2016(01)
博士论文
[1]静/动态培养模式对CIK细胞体外扩增与代谢特性的影响及其机制[D]. 张伟伟.华东理工大学 2019
[2]含钽壳聚糖支架在骨质疏松性骨缺损修复中的应用研究[D]. 王安.中国人民解放军海军军医大学 2018
[3]组织工程人工骨修复兔下颌骨缺损的实验研究[D]. 王婷.中国医科大学 2018
[4]周期性动态压力对成骨细胞CLC-3离子通道影响的机制研究[D]. 王大维.河北医科大学 2017
[5]可注射细胞微球明胶复合物联合血小板裂解液在牙组织工程中的应用研究[D]. 陈博.第四军医大学 2015
本文编号：3657663
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
引言
第1章 实验研究
1.1 材料与方法
1.1.1 实验材料
1.1.2 主要实验试剂
1.1.3 主要实验仪器
1.1.4 主要试剂的配置
1.1.5 多孔钽的大体和微观观察
1.1.6 MG63细胞的培养和鉴定
1.1.7 MG63细胞和多孔钽支架复合培养
1.1.8 鬼笔环肽染色MG63细胞和多孔钽材料复合物
1.1.9 血小板裂解液的制备
1.1.10 CCK-8法筛选血小板裂解液最佳体积分数
1.1.11 血小板裂解液与MG63细胞复合培养
1.1.12 实验分组
1.1.13 ELISA 法检测成骨细胞COL-1、RUNX2、OPN表达情况
1.1.14 Western blot法检测成骨细胞COL-1、RUNX2、OPN表达情况
1.1.15 碱性磷酸酶试剂盒检测ALP活性情况
1.1.16 钙离子检测试剂盒检测钙离子含量情况
1.1.17 动态和静态培养中乳酸/葡萄糖含量情况
1.1.18 统计学分析
1.2 结果
1.2.1 国产多孔钽材料大体和微观结构以及细胞转瓶培养装置
1.2.2 MG63细胞形态学观察
1.2.3 荧光显微镜观察鬼笔环肽染色MG63细胞和多孔钽材料复合
1.2.4 血小板裂解液最佳体积分数筛选
1.2.5 ELISA法检测成骨因子的表达结果
1.2.6 Western blot法检测成骨因子表达结果
1.2.7 碱性磷酸酶活性检测结果
1.2.8 钙离子检测结果
1.2.9 各组细胞乳酸、葡萄糖检测结果
1.3 讨论
1.3.1 MG63细胞与多孔钽共生长情况良好
1.3.2 PL对成骨过程具有增强作用
1.3.3 动态培养和PL对MG63细胞复合多孔钽能增强成骨基因表达
1.3.4 动态培养能够改善细胞培养环境
1.4 小结
参考文献
结论
第2章 综述 基因治疗骨关节炎的研究进展
2.1 关节炎的病理机制
2.2 基因治疗的概念
2.3 基因治疗的策略
2.3.1 软骨损伤相关目的基因的选择
2.3.2 基因治疗的靶细胞
2.3.3 导入基因的表达载体
2.3.4 基因的递送方式
2.4 基因的组合治疗和RNA技术
2.5 总结与展望
参考文献
致谢
在学期间研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]骨组织工程多孔生物支架设计研究进展[J]. 屈华伟,韩振宇,卓越,富宏亚. 机械工程学报. 2019(15)
[2]多孔金属骨组织支架的研究进展[J]. 杨伽捷,朱裕昌,杨春喜. 实用骨科杂志. 2018(02)
[3]TGF-β and BMP signaling in osteoblast,skeletal development,and bone formation,homeostasis and disease[J]. Mengrui Wu,Guiqian Chen,Yi-Ping Li. Bone Research. 2016(01)
博士论文
[1]静/动态培养模式对CIK细胞体外扩增与代谢特性的影响及其机制[D]. 张伟伟.华东理工大学 2019
[2]含钽壳聚糖支架在骨质疏松性骨缺损修复中的应用研究[D]. 王安.中国人民解放军海军军医大学 2018
[3]组织工程人工骨修复兔下颌骨缺损的实验研究[D]. 王婷.中国医科大学 2018
[4]周期性动态压力对成骨细胞CLC-3离子通道影响的机制研究[D]. 王大维.河北医科大学 2017
[5]可注射细胞微球明胶复合物联合血小板裂解液在牙组织工程中的应用研究[D]. 陈博.第四军医大学 2015
本文编号：3657663
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