Ti-O表面固定手性硒代胱氨酸及多肽KREDVC选择性促进内皮化的研究
发布时间：2022-09-28 20:21
近年来,药物洗脱支架已成为治疗动脉粥样硬化的主要手段,但是由于内皮化延迟或不完全导致的晚期血栓及再狭窄,仍是其植入失败的主要原因。所以支架材料内皮化或诱导原位内皮化是预防晚期血栓形成的有希望的策略。因此,将药物洗脱支架进行生物功能分子修饰获得原位内皮化是近年来研究的热点。本文通过在Ti-O膜表面沉积聚多巴胺过渡层,然后将手性硒代胱氨酸和多肽KREDVC固定在Ti-O膜表面,构建具有NO释放的功能手性表面,以实现在炎症环境下选择性内皮化的效果。在本文中,通过X光电子能谱（XPS）、原子力显微镜（AFM）、水接触角（WCA）、胺基羧基定量、QCM-D和样品催化释放一氧化氮（NO）等检测方法对改性前后的材料进行表征。XPS、AFM、WCA、氨羧基定量及QCM-D结果均表明手性硒代胱氨酸和多肽KREDVC成功固定在多巴胺表面,且手性硒代胱氨酸和KREDVC的接枝比为7:1。QCM-D结果表明虽然手性分子的固定量一致但L型手性分子表面的蛋白粘附量多于D型表面。NO释放结果表明,材料可以稳定持续的释放NO,L-REDV样品催化释放的NO速度为:1.21±0.05×10-10m...
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 动脉粥样硬化的发病机制
1.2 动脉粥样硬化的介入治疗进展
1.3 心血管支架表面改性研究进展
1.3.1 心血管支架材料表面改性提高血液相容性研究进展
1.3.2 心血管支架材料表面改性促内皮化研究进展
1.4 促内皮细胞特异性粘附多肽REDV及其用于表面改性
1.5 生物信号分子---一氧化氮(NO)
1.5.1 NO的来源和作用机制
1.5.2 NO在心血管支架材料上的应用
1.5.3 NO与氧化应激
1.6 手性界面生物材料
1.7 论文研究目的与意义、内容及技术路线
1.7.1 研究目的及意义
1.7.2 研究内容
1.7.3 技术路线
第二章 Ti-O表面固定手性硒代胱氨酸及肽KREDVC的制备与表征
2.1 引言
2.2 样品的制备
2.2.1 Ti-O薄膜的制备
2.2.2 Ti-O薄膜表面沉积聚多巴胺
2.2.3 不同手性硒代胱氨酸在聚多巴胺表面的固定
2.2.4 短肽KREDVC在硒代胱氨酸表面的接枝
2.3 材料学表征方法
2.3.1 椭圆偏光仪
2.3.2 X射线光电子能谱
2.3.3 扫描电子显微镜
2.3.4 原子力显微镜
2.3.5 水接触角
2.3.6 胺基及羧基定量
2.3.6.1 胺基定量
2.3.6.2 羧基定量
2.3.7 QCM-D
2.3.8 体外催化释放NO
2.4 结果与分析
2.4.1 椭圆偏光结果
2.4.2 XPS结果
2.4.3 SEM结果
2.4.4 AFM结果
2.4.5 水接触角结果
2.4.6 表面胺基和羧基定量结果
2.4.7 QCM-D结果
2.4.8 体外催化释放NO结果
2.5 本章小结
第三章 材料的血液相容性研究
3.1 引言
3.2 血液相容性评价方法
3.2.1 纤维蛋白原粘附与变性实验
3.2.2 体外血小板粘附实验
3.2.3 溶血实验
3.3 结果与分析
3.3.1 纤维蛋白原粘附与变性结果分析
3.3.2 体外血小板的粘附与激活实验结果与分析
3.3.3 溶血实验结果分析
3.4 文章小结
第四章 材料的细胞相容性评价
4.1 CCK-8步骤及各染色方法
4.1.1 CCK-8步骤
4.1.2 免疫荧光染色方法
4.1.3 AO/PI染色原理及方法
4.2 细胞相容性评价方法
4.2.1 内皮细胞的体外培养
4.2.1.1 人脐静脉内皮细胞的提取
4.2.1.2 内皮细胞的体外静态培养
4.2.1.3 内皮细胞的体外迁移
4.2.2 平滑肌细胞的体外培养
4.2.2.1 人脐动脉平滑肌细胞的提取
4.2.2.2 平滑肌细胞的体外静态培养
4.2.2.3 平滑肌细胞的体外迁移
4.2.3 内皮和平滑肌细胞的共培养
4.2.4 巨噬细胞的体外静态培养
4.2.5 过氧化损伤模型下内皮细胞的培养
4.2.5.1 H_2O_2/EC损伤模型下内皮细胞的培养
4.2.5.2 样品释放NO对 ECs分泌NO功能影响的评价
4.3 结果与分析
4.3.1 内皮细胞的铺展、粘附与迁移结果与分析
4.3.2 平滑肌细胞的铺展、粘附、增殖与迁移结果与分析
4.3.3 EC和 SMC共培养结果与分析
4.3.4 巨噬细胞的粘附及炎症因子的释放分析
4.3.5 过氧化损伤模型下内皮细胞的培养结果分析
4.4 本章小结
第五章 小鼠体内植入实验
5.1 样品的制备及植入方法
5.1.1 样品的制备
5.1.2 样品丝的植入方法
5.2 样品的取出、切片和免疫荧光染色观察
5.3 结果分析与讨论
5.4 本章小结
第六章 表面手性对细胞行为影响及与NO和KREDVC协同作用促内皮化的机理讨论
6.1 表面手性对细胞粘附行为的影响
6.2 表面手性、NO及KREDVC协同作用对内皮化的影响
6.3 表面手性、NO及KREDVC协同作用对内膜增生的影响
结论
致谢
参考文献
攻读硕士期间发表的论文和专利情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]NOS及NO/cGMP信号通路对哺乳动物卵泡发育的调控作用[J]. 许木林,郑开之,孙思宇,石放雄. 中国细胞生物学学报. 2013(07)
[2]医用生物材料血液相容性评价研究概况[J]. 刘欣,史弘道. 透析与人工器官. 2003(01)
硕士论文
[1]TiO表面固定硒代胱氨酸及其NO释放抑制氧化应激内皮细胞损伤的研究[D]. 唐金.西南交通大学 2018
[2]过氧化氢介导的氧化应激损伤调控瓣膜纤维化钙化的分子机制研究[D]. 熊普熹.第二军医大学 2014
本文编号：3682321
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 动脉粥样硬化的发病机制
1.2 动脉粥样硬化的介入治疗进展
1.3 心血管支架表面改性研究进展
1.3.1 心血管支架材料表面改性提高血液相容性研究进展
1.3.2 心血管支架材料表面改性促内皮化研究进展
1.4 促内皮细胞特异性粘附多肽REDV及其用于表面改性
1.5 生物信号分子---一氧化氮(NO)
1.5.1 NO的来源和作用机制
1.5.2 NO在心血管支架材料上的应用
1.5.3 NO与氧化应激
1.6 手性界面生物材料
1.7 论文研究目的与意义、内容及技术路线
1.7.1 研究目的及意义
1.7.2 研究内容
1.7.3 技术路线
第二章 Ti-O表面固定手性硒代胱氨酸及肽KREDVC的制备与表征
2.1 引言
2.2 样品的制备
2.2.1 Ti-O薄膜的制备
2.2.2 Ti-O薄膜表面沉积聚多巴胺
2.2.3 不同手性硒代胱氨酸在聚多巴胺表面的固定
2.2.4 短肽KREDVC在硒代胱氨酸表面的接枝
2.3 材料学表征方法
2.3.1 椭圆偏光仪
2.3.2 X射线光电子能谱
2.3.3 扫描电子显微镜
2.3.4 原子力显微镜
2.3.5 水接触角
2.3.6 胺基及羧基定量
2.3.6.1 胺基定量
2.3.6.2 羧基定量
2.3.7 QCM-D
2.3.8 体外催化释放NO
2.4 结果与分析
2.4.1 椭圆偏光结果
2.4.2 XPS结果
2.4.3 SEM结果
2.4.4 AFM结果
2.4.5 水接触角结果
2.4.6 表面胺基和羧基定量结果
2.4.7 QCM-D结果
2.4.8 体外催化释放NO结果
2.5 本章小结
第三章 材料的血液相容性研究
3.1 引言
3.2 血液相容性评价方法
3.2.1 纤维蛋白原粘附与变性实验
3.2.2 体外血小板粘附实验
3.2.3 溶血实验
3.3 结果与分析
3.3.1 纤维蛋白原粘附与变性结果分析
3.3.2 体外血小板的粘附与激活实验结果与分析
3.3.3 溶血实验结果分析
3.4 文章小结
第四章 材料的细胞相容性评价
4.1 CCK-8步骤及各染色方法
4.1.1 CCK-8步骤
4.1.2 免疫荧光染色方法
4.1.3 AO/PI染色原理及方法
4.2 细胞相容性评价方法
4.2.1 内皮细胞的体外培养
4.2.1.1 人脐静脉内皮细胞的提取
4.2.1.2 内皮细胞的体外静态培养
4.2.1.3 内皮细胞的体外迁移
4.2.2 平滑肌细胞的体外培养
4.2.2.1 人脐动脉平滑肌细胞的提取
4.2.2.2 平滑肌细胞的体外静态培养
4.2.2.3 平滑肌细胞的体外迁移
4.2.3 内皮和平滑肌细胞的共培养
4.2.4 巨噬细胞的体外静态培养
4.2.5 过氧化损伤模型下内皮细胞的培养
4.2.5.1 H_2O_2/EC损伤模型下内皮细胞的培养
4.2.5.2 样品释放NO对 ECs分泌NO功能影响的评价
4.3 结果与分析
4.3.1 内皮细胞的铺展、粘附与迁移结果与分析
4.3.2 平滑肌细胞的铺展、粘附、增殖与迁移结果与分析
4.3.3 EC和 SMC共培养结果与分析
4.3.4 巨噬细胞的粘附及炎症因子的释放分析
4.3.5 过氧化损伤模型下内皮细胞的培养结果分析
4.4 本章小结
第五章 小鼠体内植入实验
5.1 样品的制备及植入方法
5.1.1 样品的制备
5.1.2 样品丝的植入方法
5.2 样品的取出、切片和免疫荧光染色观察
5.3 结果分析与讨论
5.4 本章小结
第六章 表面手性对细胞行为影响及与NO和KREDVC协同作用促内皮化的机理讨论
6.1 表面手性对细胞粘附行为的影响
6.2 表面手性、NO及KREDVC协同作用对内皮化的影响
6.3 表面手性、NO及KREDVC协同作用对内膜增生的影响
结论
致谢
参考文献
攻读硕士期间发表的论文和专利情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]NOS及NO/cGMP信号通路对哺乳动物卵泡发育的调控作用[J]. 许木林,郑开之,孙思宇,石放雄. 中国细胞生物学学报. 2013(07)
[2]医用生物材料血液相容性评价研究概况[J]. 刘欣,史弘道. 透析与人工器官. 2003(01)
硕士论文
[1]TiO表面固定硒代胱氨酸及其NO释放抑制氧化应激内皮细胞损伤的研究[D]. 唐金.西南交通大学 2018
[2]过氧化氢介导的氧化应激损伤调控瓣膜纤维化钙化的分子机制研究[D]. 熊普熹.第二军医大学 2014
本文编号：3682321
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