同轴静电纺丝法制备芯—壳结构pEGFP-N1-BMP-2/PLGA质粒复合材料及其相关研究

发布时间：2022-09-30 15:35

　　基因活化基质（gene activated matrix,GAM）是将可降解生物支架材料与质粒DNA载体相结合,形成一种基因局部释放系统。GAM既能够提供一个具有一定机械强度、可降解的多孔支架供细胞长入,为种子细胞提供空间支持;又可以通过支架材料直接承载基因如质粒DNA或基因质粒与转染试剂的混合物,继而局部转染种子细胞,分泌促进组织修复的生长因子,特异性诱导种子细胞的定向分化,最终促进组织的再生。静电纺丝是一种制备纳米级纤维的方法。通过静电纺丝制备的纤维膜具有比表面积高、孔隙率大等优点,类似于天然细胞外基质的结构,有利于细胞的粘附、生长、繁殖。传统的静电纺丝方法制备GAM,需将可降解高分子材料与包含质粒的质粒载体混合在一起。电纺过程中质粒不可避免的会接触到有机溶剂,这对质粒的活性有一定影响。此外,混纺形成的纳米纤维支架中的基因释放较快,存在突释效应。本研究选择同轴静电纺丝方法来制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物（poly lactic-co-glycolic acid,PLGA）与骨形成蛋白-2（Bone Morphogenetic Protein-2,BMP-2）质粒微球的芯壳型纤维,构建壳... 

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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前言
文献回顾
实验一 重组质粒pEGFP-N1-BMP-2的构建
    1 材料
        1.1 仪器
        1.2 试剂
        1.3 质粒
    2 方法
        2.1 溶液配制
        2.2 表达载体酶切、纯化
        2.3 目的基因片段的获取
        2.4 重组质粒的连接
        2.5 大肠杆菌感受态制备
        2.6 重组质粒的鉴定
        2.7 重组质粒的大量扩增、提取
        2.8 大量提取的重组质粒纯度及浓度测量
    3 结果
        3.1 表达载体酶切鉴定结果
        3.2 目的基因PCR结果鉴定
        3.3 重组质粒PCR结果鉴定
        3.4 测序鉴定结果
        3.5 大量提取的重组质粒纯度及浓度
    4 讨论
实验二 同轴电纺芯-壳型pEGFP-N1-BMP-2/PLGA的制备及表征
    1 材料
        1.1 仪器
        1.2 试剂、材料
    2 方法
        2.1 同轴电纺PEI/PLGA纤维的制备及检测
        2.2 质粒微球的制备
        2.3 同轴静电纺丝pEGFP-N1-BMP-2/PLGA纤维及检测
        2.4 统计方法
    3 结果
        3.1 同轴电纺PEI/PLGA纤维
        3.2 同轴电纺pEGFP-N1-BMP-2/PLGA纤维
    4 讨论
实验三 同轴电纺pEGFP-N1-BMP-2/PLGA体外转染牙周膜干细胞实验
    1 仪器与材料
        1.1 仪器
        1.2 材料与试剂
    2 方法
        2.1 溶液配制
        2.2 牙周膜干细胞分离、培养、鉴定
        2.3 牙周膜干细胞与pEGFP-N1-BMP-2/PLGA电纺纤维膜的生物相容性
        2.4 pEGFP-N1-BMP-2/PLGA转染牙周膜干细胞及检测
        2.5 统计方法
    3 结果
        3.1 牙周膜干细胞的组织学观察
        3.2 牙周膜干细胞的流式检测相关抗原鉴定
        3.3 牙周膜干细胞的克隆形成率
        3.4 牙周膜干细胞成骨诱导
        3.5 牙周膜干细胞成脂诱导
        3.6 牙周膜干细胞与pEGFP-N1-BMP-2/PLGA电纺纤维膜的生物相容性
        3.7 转染情况
    4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢



本文编号：3683812