BMP2和BMP7基因共转染兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨的实验研究

发布时间：2022-10-29 22:28

　　研究目的通过BMP2和BMP7共转染兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）,以富血小板血浆凝胶（PRP）为支架,建立一种可注射型的组织工程骨。 研究方法以全骨髓贴壁法分离、得到兔BMSCs,并通过定向分化,细胞表面标志物检测等方法确定为BMSCs。 以pAd/CMV/V5-Dest为载体,构建BMP2腺病毒和BMP7腺病毒,并测定病毒的滴度和对兔BMSCs的合适的转染复数值（MOI）。并以Realtime PCR检测转染后细胞BMP2和BMP7基因mRNA表达情况;以免疫荧光检测转染后BMP2和BMP7基因的蛋白表达情况。 将分离得到的兔BMSCs传代至第三代,分成五组,分别作以下处理:a、空白对照:继续以常规培养基培养;b、成骨诱导液诱导组:继续以成骨诱导分化培养基培养;c、BMP2基因转染组:单独以BMP2腺病毒进行转染;d、BMP7基因转染组:单独以BMP7腺病毒进行转染;e、BMP2和BMP7基因共转染组:以BMP2腺病毒和BMP7腺病毒进行联合转染。培养第7天、14天以Realtime PCR测定各组细胞Runx-2、Osx、AKP和Collagen I基因... 

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
前言
    参考文献
第一部分 兔骨髓间充质干细胞的分离以及其基本生物学特性的研究
    实验材料
    实验方法
    实验结果
    讨论
    参考文献
第二部分 BMP-2 腺病毒载体的构建及BMP2、BMP7 共转染兔骨髓间充质干细胞后BMP2 和BMP7 蛋白的表达
    实验材料
    实验方法
    实验结果
    讨论
    参考文献
第三部分 BMP2和BMP7腺病毒联合转染兔骨髓间充质干细胞后向成骨细胞方向的分化
    实验材料
    实验方法
    实验结果
    讨论
    参考文献
第四部分 富血小板血浆凝胶支架的制备以及转基因骨 髓间充质干细胞与自体血小板凝胶生物支架 组织工程骨的构建
    实验材料
    实验方法
    实验结果
    讨论
    参考文献
全文结论
综述
    参考文献
附录1 插图
附录2 完成论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]胫骨骨不连的手术治疗进展[J]. 殷兵,张奇,张英泽.  中国矫形外科杂志. 2010(20)
[2]富含血小板血浆凝胶结构用于组织工程载体可能性的扫描电镜观察[J]. 羊书勇,毛天球,程晓兵,杨耀武,岳进,吴仲寅.  中国临床康复. 2005(26)
[3]成人骨髓间充质干细胞的体外培养和表型鉴定[J]. 柳向东,柴冈,李东,崔磊,刘伟,曹谊林.  上海第二医科大学学报. 2004(04)
[4]长骨骨不连的治疗进展[J]. 杨明.  中国矫形外科杂志. 2003(02)
[5]骨折愈合过程中BMP3基因表达的实验研究[J]. 刘建，胡蕴玉，马真胜，吕荣，刘新平，胡敏.  中华外科杂志. 1996(10)
[6]骨缺损中内源性BMP的分布及其作用[J]. 张子军，卢世壁，王继芳，张伯勋.  中华外科杂志. 1996(10)



本文编号：3698533