KGN诱导人脐带间充质干细胞成软骨分化的体外研究

发布时间：2023-01-14 15:27

　　目的:评估新型小分子化合物Kartogenin（KGN）在体外二维培养环境下对人脐带间充质干细胞成软骨分化的诱导作用;制备、优化羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠自交联自愈合水凝胶,研究此水凝胶应用于软骨组织工程支架领域的可行性;探讨KGN在水凝胶三维培养环境中诱导人脐带间充质干细胞成软骨分化效果。方法:1.采用细胞球团培养法评估KGN诱导人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化效果。首先,从人脐带Wharton胶内提取人脐带间充质干细胞,通过细胞流式鉴定细胞性质。将人脐带间充质干细胞通过重悬离心成细胞团块,采用不同组份的成软骨诱导液（KGN为实验组,TGF-β3为阳性对照组,DMSO为空白对照组,KGN与TGF-β3联合应用组〈TK组〉）,分别诱导人脐带间充质干细胞21天后,通过HE和AB组织学定性染色,软骨蛋白和胶原的免疫荧光染色以及成软骨相关基因RT-PCR检测,分析KGN对人脐带间充质干细胞的成软骨诱导分化作用。2.利用羧甲基壳聚糖内的氨基与氧化海藻酸钠内的醛基所发生的席夫碱反应,以不同交联比例制备水凝胶,通过扫描电镜、凝胶流变分析、体外溶胀率和降解率检测、软骨粘附性测试等方法评估不同交联度水... 

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、体外二维培养环境评估KGN诱导人脐带间充质干细胞成软骨分化效果
    1.1 对象和方法
        1.1.1 实验试剂和设备
        1.1.2 人脐带间充质干细胞的分离、培养及体外扩增
        1.1.3 人脐带间充质干细胞的流式细胞学分析
        1.1.4 体外诱导人脐带间充质干细胞成软骨分化
        1.1.5 不同组份软骨诱导液对对人脐带间充质干细胞的增殖影响
        1.1.6 软骨细胞球团的组织学和免疫组化分析
        1.1.7 细胞球的RT-PCR检测软骨分化相关分析
        1.1.8 统计学分析
    1.2 结果
        1.2.1 诱导后的软骨球团和人脐带间充质干细胞的大体观察
        1.2.2 不同组份软骨培养液对人脐带间充质干细胞增殖的影响
        1.2.3 人脐带间充质干细胞的流式分析结果
        1.2.4 诱导后软骨球的组织化学和免疫组化分析
        1.2.5 成软骨相关基因的RT-PCR表达量分析
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、自交联自愈合软骨组织工程水凝胶支架的制备及表征
    2.1 对象和方法
        2.1.1 实验材料和设备
        2.1.2 水凝胶的制备
        2.1.3 水凝胶的流变学分析
        2.1.4 水凝胶的扫描电镜观察
        2.1.5 水凝胶与软骨组织的粘附拉力测试
        2.1.6 水凝胶的溶胀度
        2.1.7 水凝胶的体外降解实验
        2.1.8 统计学分析
    2.2 结果
        2.2.1 水凝胶的成胶效果和凝胶粘附状态
        2.2.2 水凝胶的微观形态观察
        2.2.3 水凝胶的流变学分析
        2.2.4 水凝胶与软骨组织的粘附拉力分析
        2.2.5 水凝胶的溶胀率分析
        2.2.6 水凝胶的降解率分析
    2.3 讨论
    2.4 小结
三、体外三维培养环境评估KGN诱导人脐带间充质干细胞的成软骨分化效果
    3.1 对象和方法
        3.1.1 实验试剂和设备
        3.1.2 人脐带间充质干细胞的分离、培养及体外扩增
        3.1.3 自交联自愈合水凝胶的生物相容性评价
        3.1.4 评价细胞-水凝胶复合体的成软骨诱导效果
        3.1.5 RT-PCR检测细胞-凝胶复合体的软骨分化相关基因表达
        3.1.6 诱导后细胞-支架复合体的蛋白多糖和Ⅱ型胶原定量检测
        3.1.7 统计学分析
    3.2 结果
        3.2.1 自交联自愈合水凝胶的生物相容性评估
        3.2.2 KGN诱导人脐带间充质干细胞在三维水凝胶内的成软骨分化效果
    3.3 讨论
    3.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 颞下颌关节盘和髁突组织工程研究现状和进展
    参考文献
致谢
个人简介



本文编号：3730687