骨形态发生蛋白缓释载体的研制与评价

发布时间：2023-02-09 13:26

　　目的:1、比较骨形态发生蛋白2(BMP2)和BMP7和化学诱导配方(地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠)诱导MC3T3-E1细胞成骨分化的能力,为下一步实验中缓释材料负载因子的选取提供依据。2、虽然BMPs在许多临床应用中被用来促进骨形成,但是,BMPs在体内固有的不稳定,因此需要与载体结合进行控制性递送。本研究开发了一种新型高效的纤维蛋白胶/纤维粘连蛋白/肝素(FG/Fn/Hep)为载体的BMP2缓释体系,用于骨缺损修复。研究方法:1、在比较BMP2、BMP7和化学配方的成骨诱导效果的实验中,通过茜素红染色钙结节,定量检测碱性磷酸酶(ALP),免疫组化和ELISA检测RUNT相关转录因子-2(RUNX-2)、骨桥蛋白(OPN)和骨钙素(OCN)的表达来评价成骨诱导效果。2、在制备新型的FG/Fn/Hep-BMP2缓释体系并评价其骨修复性能的实验中,设计纤维蛋白胶作为组织修复细胞浸润的临时支架,纤维粘连蛋白为细胞提供粘附位点,并作为纤维蛋白和肝素之间的连接器,肝素作为控制释放BMP2和防止BMP2被体内蛋白酶降解的储存库。通过体外释放实验检测缓释体系释放BMP2情况。通过MC3T3-E...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 MC3T3-E1细胞诱导成骨的方法学比较与分析
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂
        2.2 主要仪器
        2.3 实验方法
            2.3.1 化学配方与BMP2和BMP7 诱导培养细胞
            2.3.2 矿化测定
            2.3.3 碱性磷酸酶测定
            2.3.4 免疫细胞化学染色
            2.3.5 免疫组化半定量
            2.3.6 RUNX-2、OPN和 OCN的 ELISA检测
            2.3.7 统计分析
    3 结果
        3.1 MC3T3-E1细胞培养的矿化分析
        3.2 碱性磷酸酶的定量检测
        3.3 免疫细胞化学
            3.3.1免疫细胞化学检测RUNX-2
            3.3.2 免疫细胞化学检测OPN
            3.3.3 免疫细胞化学检测OCN
            3.3.4 免疫细胞化学半定量分析 RUNX-2、 OPN 和 OCN
        3.4 ELISA 检测 RUNX-2、OPN 和 OCN
    4 讨论
    5 小结
第二部分 纤维蛋白胶/纤维粘连蛋白/肝素为基础的BMP2 缓释系统诱导MC3T3-E1细胞成骨及大鼠颅骨临界缺损成骨
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂
        2.2 主要仪器
        2.3 FG/Fn/Hep-BMP2水凝胶的制备
        2.4 用扫描电镜观察水凝胶的微观结构
        2.5 水凝胶力学性能的流变分析
        2.6 水凝胶体外释放BMP2曲线
        2.7 体外成骨实验的方案设计
        2.8 RUNX-2、OPN、OCN和 COL-Ⅰ的q RT-PCR检测… …… … …… ……
        2.9 动物与外科手术
        2.10 大鼠颅骨的放射学检查
        2.11 大鼠颅骨缺损修复的组织学评价
        2.12 统计分析
    3 结果
        3.1 三种水凝胶的力学性能及结构观察
        3.2 BMP2体外释放曲线
        3.3 FG/Fn-BMP2 诱导MC3T3-E1 细胞体外成骨
        3.4 MC3T3-E1细胞培养的矿化分析
        3.5 碱性磷酸酶定量分析
        3.6 RUNX-2、OPN和 OCN的免疫细胞化学研究… … … …… …… … …
        3.7 RUNX-2、OPN、OCN and COL-Ⅰ的ELISA检测
        3.8 RUNX-2、OPN、OCN and COL-Ⅰ的q RT-PCR… … … … …… … …
        3.9 大鼠颅骨的放射学检查
        3.10 大鼠颅骨缺损修复的组织学评价
    4 讨论
    5 小结
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3738820