纳米银核酸功能化探针在miRNA-21检测中的研究与应用

发布时间：2023-03-23 20:12

　　银纳米粒子作为易于合成和修饰的等离子体纳米材料之一,具有独特且优越的光学性质,如高的摩尔消光系数、表面增强拉曼散射效应、金属表面增强荧光效应,局域表面等离子体共振效应等。银纳米粒子在许多生物标志物以及药物、污染物等的检测中发挥出良好的效果。miRNAs又称为微小RNA,是一种同源性高、序列短、易于降解的内源性非编码的单链RNA,研究证明miRNAs与肿瘤的发生和发展具有密切的相关性,不同种类的miRNAs能够作为原癌基因或者抑癌基因发挥生命调节作用。因此准确、灵敏地检测miRNAs对肿瘤的早期诊断和治疗具有重要价值。本论文以在多种癌症细胞内高水平表达的miRNA-21作为检测对象,基于荧光偏振检测,荧光成像及检测等方法,设计了一系列银纳米粒子探针,并将其用于miRNA-21的定量检测以及细胞内成像分析。具体研究内容包括:(1)发展了一种基于Ag₁₀NPs与链取代反应共同发挥作用的高灵敏miRNA-21分析检测方法,能够在标准体系以及真实生物样品中实现miRNAs的快速、准确和灵敏检测。它是一种恒温、不需要酶辅助的检测方法,克服了其他检测方法步骤复杂、反应时间长、需...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 贵金属纳米材料概述
    1.2 银纳米粒子的合成
    1.3 银纳米粒子的功能化修饰
    1.4 银纳米粒子在生物传感平台构建中的应用
        1.4.1 比色法
        1.4.2 荧光法
        1.4.3 表面增强拉曼散射法
    1.5 基于DNA纳米技术的信号放大方法
    1.6 本研究论文的构思
    参考文献
第二章 基于核酸修饰纳米银的循环链取代检测miRNA-21的荧光偏振方法
    2.1 前言
    2.2 实验部分
        2.2.1 材料与试剂
        2.2.2 十面体纳米银Ag₁₀NPs的合成
        2.2.3 Ag₁₀NPs的功能化修饰及表征
        2.2.4 凝胶电泳实验
        2.2.5 缓冲溶液中miRNA-21的荧光偏振检测
        2.2.6 总RNA提取物的制备
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 十面体纳米银Ag₁₀NPs材料的表征
        2.3.2 基于Ag₁₀NPs与循环链取代反应的信号放大策略
        2.3.3 基于核酸修饰纳米银的循环链取代检测miRNA-21的荧光偏振方法的可行性研究
        2.3.4 基于核酸修饰纳米银的循环链取代检测miRNA-21的荧光偏振方法的条件优化
        2.3.5 缓冲液体系中目标检测物miRNA-21的线性检测
        2.3.6 特异性检测
        2.3.7 真实样品中miRNA-21的检测
    2.4 本章总结
    参考文献
第三章 单细胞水平miRNA-21的检测与成像
    3.1 前言
    3.2 实验部分
        3.2.1 材料与试剂
        3.2.2 十面体纳米银Ag₁₀NPs的合成
        3.2.3 DNA修饰的纳米银探针的合成
        3.2.4 质粒扩增与质粒提取
        3.2.5 荧光共定位信号的采集
            3.2.5.1 质粒转染
            3.2.5.2 纳米银探针孵育
            3.2.5.3 荧光信号采集
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 纳米银探针的设计与条件优化
            3.3.1.1 纳米银探针荧光基团的选择
            3.3.1.2 探针的稳定性与条件优化
            3.3.1.3 纳米银与荧光基团之间的距离优化
            3.3.1.4 纳米银探针上带有的功能性基团选择
            3.3.1.5 反应时间优化
        3.3.2 缓冲液体系中纳米银探针的灵敏度检测
        3.3.3 探针对于不同细胞的特异性
        3.3.4 质粒转染条件筛选
        3.3.5 细胞内的荧光共定位成像
    3.4 本章总结
    参考文献
附录 攻读硕士学位期间已发表或待发表的论文
致谢



本文编号：3768671