新型3D打印双层仿生支架用于大鼠子宫全层损伤的再生修复研究
发布时间：2023-03-29 03:50
宫腔手术或感染等原因一旦伤及子宫基底层,将导致子宫内膜修复再生障碍、宫腔纤维化、瘢痕化、粘连,严重者可导致育龄妇女不孕。目前的防治手段(防止纤维化、粘连及促进受损区域血管再生等)只适合小面积和薄层子宫内膜损伤,尚无有效的手段修复大面积、全层子宫损伤,而组织工程技术是子宫再生修复最具潜力的方法之一。如今用于子宫再生修复的支架主要以单层支架为主,缺乏对子宫生理结构的仿生,选择合适的多层仿生支架,用以模拟体内子宫上皮层、内膜层、肌层等多层结构,对于全层子宫的功能再生至关重要。本研究展示了一种可负载细胞的3D生物打印双层仿生支架用于大鼠子宫全层损伤的再生修复,通过优化海藻酸钠和透明质酸的混合比例制成复合水凝胶,作为打印的生物墨水,运用3D生物打印技术构建含子宫内膜腔上皮层和子宫内膜功能层的双层支架。采用挤出式3D生物打印方法,首先将海藻酸钠-透明质酸水凝胶与新生大鼠子宫基质细胞混合后打印出具有纵横交错网格结构的多层子宫内膜功能层,再将海藻酸钠-透明质酸水凝胶与新生大鼠子宫上皮细胞混合制成单层子宫内膜腔上皮层,进而构成新型双层仿生支架。体外实验证明该支架拥有良好的机械强度(191.5±14.98...
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词
绪论
第一章 3D打印双层仿生支架的制备和表征
1.1 引言
1.2 实验仪器和材料
1.2.1 材料和试剂
1.2.2 实验仪器
1.2.3 相关溶液的配置
1.2.3.1 外用PBS溶液配制
1.2.3.2 细胞房用PBS溶液配制
1.2.3.31 0%水合氯醛溶液配制
1.2.3.45 %氯化钙溶液配制
1.2.3.5 海藻酸钠-透明质酸水凝胶配制
1.2.4 实验动物
1.3 实验方法
1.3.1 优化海藻酸钠-透明质酸水凝胶浓度比例
1.3.1.1 海藻酸钠-透明质酸水凝胶的配制
1.3.1.2 海藻酸钠-透明质酸水凝胶大体图观察
1.3.1.3 海藻酸钠-透明质酸水凝胶的力学性能检测
1.3.1.4 海藻酸钠-透明质酸水凝胶微观形态观察
1.3.2 海藻酸钠-透明质酸水凝胶的生物学性能检测
1.3.2.1 海藻酸钠-透明质酸水凝胶的细胞增殖曲线检测
1.3.2.2 海藻酸钠-透明质酸水凝胶的细胞活性检测
1.3.2.3 海藻酸钠-透明质酸水凝胶体内组织相容性检测
1.3.3 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞分离和培养
1.3.3.1 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞分离
1.3.3.2 细胞冻存
1.3.4 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞鉴定
1.3.4.1 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞表面标记物鉴定
1.3.4.2 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞RNA水平表达鉴定
1.3.5 3D打印的负载细胞的海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的体外表征
1.3.5.1 海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的3D打印
1.3.5.2 海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的形态观察
1.3.5.3 3D打印的海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的荧光表征
1.3.5.4 3D打印的海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的细胞活性
1.4 实验结果
1.4.1 优化海藻酸钠-透明质酸水凝胶浓度比例
1.4.2 海藻酸钠-透明质酸水凝胶生物学性能检测
1.4.3 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞分离培养及鉴定
1.4.4 3D打印的负载细胞的海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的表征
1.5 讨论
第二章 3D打印双层仿生支架修复大鼠子宫局部全层缺损的效果及机制研究
2.1 引言
2.2 实验仪器和材料
2.2.1 材料与试剂
2.2.2 实验仪器
2.2.3 相关试剂配制
2.2.3.1 4%多聚甲醛溶液配制
2.2.3.2 抗原修复液配制
2.2.3.3 盐酸酒精配制
2.2.3.4 伊红溶液配制
2.2.3.5 丽春红-品红溶液配制
2.2.3.6 2%苯胺蓝溶液配制
2.2.3.7 磷钼酸溶液配制
2.2.3.8 1%冰醋酸溶液配制
2.2.3.9 3%过氧化氢溶液配制
2.2.3.10 1%BSA配制
2.2.3.11 免疫组化及免疫荧光抗体配制
2.2.4 实验动物
2.3 实验方法
2.3.1 大鼠子宫局部全层缺损模型的构建
2.3.2 组织学分析
2.3.2.1 大鼠子宫样本包埋
2.3.2.2 HE染色
2.3.2.3 Masson染色
2.3.2.4 免疫组化染色
2.3.2.5 免疫荧光染色
2.3.2.6 缺损部位再生子宫内膜厚度测量
2.3.2.7 缺损部位再生子宫平滑肌含量测量
2.3.2.8 缺损部位再生微血管密度计数
2.3.3 再生子宫内膜功能性检测
2.3.4 统计方法
2.4 实验结果
2.4.1 3D打印双层仿生支架促进大鼠子宫局部全层缺损再生
2.4.2 子宫缺损再生部位的组织学分析
2.4.2.1 子宫缺损部位再生子宫内膜厚度
2.4.2.2 子宫缺损部位再生平滑肌含量
2.4.2.3 子宫缺损部位再生内膜中微血管形成
2.4.3 子宫损伤修复后的功能性检测
2.5 讨论
总结
参考文献
综述 组织工程技术在子宫重建中的运用
参考文献
作者简历
本文编号：3773934
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词
绪论
第一章 3D打印双层仿生支架的制备和表征
1.1 引言
1.2 实验仪器和材料
1.2.1 材料和试剂
1.2.2 实验仪器
1.2.3 相关溶液的配置
1.2.3.1 外用PBS溶液配制
1.2.3.2 细胞房用PBS溶液配制
1.2.3.31 0%水合氯醛溶液配制
1.2.3.45 %氯化钙溶液配制
1.2.3.5 海藻酸钠-透明质酸水凝胶配制
1.2.4 实验动物
1.3 实验方法
1.3.1 优化海藻酸钠-透明质酸水凝胶浓度比例
1.3.1.1 海藻酸钠-透明质酸水凝胶的配制
1.3.1.2 海藻酸钠-透明质酸水凝胶大体图观察
1.3.1.3 海藻酸钠-透明质酸水凝胶的力学性能检测
1.3.1.4 海藻酸钠-透明质酸水凝胶微观形态观察
1.3.2 海藻酸钠-透明质酸水凝胶的生物学性能检测
1.3.2.1 海藻酸钠-透明质酸水凝胶的细胞增殖曲线检测
1.3.2.2 海藻酸钠-透明质酸水凝胶的细胞活性检测
1.3.2.3 海藻酸钠-透明质酸水凝胶体内组织相容性检测
1.3.3 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞分离和培养
1.3.3.1 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞分离
1.3.3.2 细胞冻存
1.3.4 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞鉴定
1.3.4.1 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞表面标记物鉴定
1.3.4.2 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞RNA水平表达鉴定
1.3.5 3D打印的负载细胞的海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的体外表征
1.3.5.1 海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的3D打印
1.3.5.2 海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的形态观察
1.3.5.3 3D打印的海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的荧光表征
1.3.5.4 3D打印的海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的细胞活性
1.4 实验结果
1.4.1 优化海藻酸钠-透明质酸水凝胶浓度比例
1.4.2 海藻酸钠-透明质酸水凝胶生物学性能检测
1.4.3 新生大鼠子宫原代上皮细胞和基质细胞分离培养及鉴定
1.4.4 3D打印的负载细胞的海藻酸钠-透明质酸双层仿生支架的表征
1.5 讨论
第二章 3D打印双层仿生支架修复大鼠子宫局部全层缺损的效果及机制研究
2.1 引言
2.2 实验仪器和材料
2.2.1 材料与试剂
2.2.2 实验仪器
2.2.3 相关试剂配制
2.2.3.1 4%多聚甲醛溶液配制
2.2.3.2 抗原修复液配制
2.2.3.3 盐酸酒精配制
2.2.3.4 伊红溶液配制
2.2.3.5 丽春红-品红溶液配制
2.2.3.6 2%苯胺蓝溶液配制
2.2.3.7 磷钼酸溶液配制
2.2.3.8 1%冰醋酸溶液配制
2.2.3.9 3%过氧化氢溶液配制
2.2.3.10 1%BSA配制
2.2.3.11 免疫组化及免疫荧光抗体配制
2.2.4 实验动物
2.3 实验方法
2.3.1 大鼠子宫局部全层缺损模型的构建
2.3.2 组织学分析
2.3.2.1 大鼠子宫样本包埋
2.3.2.2 HE染色
2.3.2.3 Masson染色
2.3.2.4 免疫组化染色
2.3.2.5 免疫荧光染色
2.3.2.6 缺损部位再生子宫内膜厚度测量
2.3.2.7 缺损部位再生子宫平滑肌含量测量
2.3.2.8 缺损部位再生微血管密度计数
2.3.3 再生子宫内膜功能性检测
2.3.4 统计方法
2.4 实验结果
2.4.1 3D打印双层仿生支架促进大鼠子宫局部全层缺损再生
2.4.2 子宫缺损再生部位的组织学分析
2.4.2.1 子宫缺损部位再生子宫内膜厚度
2.4.2.2 子宫缺损部位再生平滑肌含量
2.4.2.3 子宫缺损部位再生内膜中微血管形成
2.4.3 子宫损伤修复后的功能性检测
2.5 讨论
总结
参考文献
综述 组织工程技术在子宫重建中的运用
参考文献
作者简历
本文编号：3773934
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