多壁碳纳米管刺激巨噬细胞活化及TGF-β/smad信号通路促纤维化研究
发布时间：2023-05-04 00:51
多壁碳纳米管由于其独特的物理化学性质,被广泛应用生物医药领域。随着碳纳米管的广泛应用,其生物安全性也引起了广大学者的关注最近已有许多研究表明MWCNTs可以诱发,大鼠(小鼠)肺部肉芽肿形成和肺部纤维化发生,然而其细胞分子机制并术阐明。因此近年来为了避免碳纳米管对人类健康的潜在危害,对碳纳米竹诱发毒性机制的研究也渐受重视。本论文选择Short MWCNTs、 Long MWCNTs两种多壁碳纳米管作为研究对象,通过模拟体外促纤维化过程,全面、系统、深入的对多壁碳纳米管促纤维化机理进行了研究,同时对MWCNTs诱导纤维化发生的分子机制做了进一步阐述。 首先我们对两种多壁碳纳米管材料进行了表征,观察到它们在缓冲液中分散性较好,并对它们的粒径大小,长度等进行了鉴定。接下来,我们采用CCK-8的方法对多壁碳纳米管对Raw264.7、NIH3T3细胞活力影响进行了检测,确定了合适的材料浓度。 随后,我们先用多壁碳纳米管孵育Raw264.7细胞,发现多壁碳纳米管可以刺激Raw264.7细胞活化,刺激Raw264.7细胞分泌相关细胞因子。并且发现两种多壁碳纳米管对Raw264.7细胞作用的强弱有明显差...
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 碳纳米管概述
1.2 由呼吸道进入的碳纳米管在机体内的分布
1.3 碳纳米管的促纤维化作用及相关机理研究
1.3.1 单壁碳纳米管促纤维化作用
1.3.2 多壁碳纳米管促纤维化作用
1.4 碳纳米管促纤维化机理的研究
1.4.1 对巨噬细胞的作用
1.4.2 对上皮细胞的作用
1.4.3 对成纤维细胞的作用
1.5 TGF-β信号通路
1.5.1 TGF-β信号通路的生物效应
1.5.2 TGF-β与纤维化及炎症反应疾病的关系
第二章 多壁碳纳米管的化学表征
2.1 引言
2.2 实验材料和方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 主要仪器
2.2.3 实验方法
2.2.3.1 TEM表征两种多壁碳纳米管的形貌
2.3 实验结果及讨论
第三章 MWCNTs对巨噬细胞作用的研究
3.1 引言
3.2 实验材料和方法
3.2.1 实验材料
3.2.1.1 主要试剂的配制
3.2.2 实验方法与步骤
3.2.2.1 RAW264.7细胞培养
3.2.2.2 RAW264.7细胞活性测定
3.2.2.3 PCR法测定RAW264.7细胞功因子mRNA
3.2.2.4 用Elisa法测定RAW264.7细胞功能因子表达
3.3 实验结果及讨论
3.3.1 Short MWCNTs、Long MWCNTs对RAW264.7细胞活性影响
3.3.2 MWCNTs对RAW264.7细胞TGF-β表达的影响
3.3.2.1 MWCNTs上调RAW264.7细胞中TGF-βmRNA水平表达
3.3.2.2 MWCNTs上调RAW264.7细胞TGF-β蛋白水平表达
3.3.3 MWCNTs对RAW264.7细胞TNF-α表达的影响
3.3.3.1 MWCNTs上调RAW264.7细胞TNF-αmRNA水平表达
3.3.3.2 MWCNTs上调RAW264.7细胞TNF-α蛋白水平表达
3.4 本章小结
第四章 MWCNTs对成纤维细胞的研究
4.1 引言
4.2 实验材料和方法
4.2.1 实验材料
4.2.1.1 主要试剂的配制
4.2.2 实验方法与步骤
4.2.2.1 NIH 3T3细胞的培养
4.2.2.2 NIH 3T3细胞活性的测定
4.2.2.3 免疫印迹(Western-blotting)法
4.3 实验结果及讨论
4.3.1 Short MWCNTs、Long MWCNTs对NIH3T3细胞活性影响
4.3.2 Short MWCNTs、Long MWCNTs上调NIH3T3 cell中a-SMA蛋白的表达
4.3.3 Long M WCNTs促进NIH3T3细胞中TGF-β/Smad信号通道的激活
4.4 本章小结
第五章 MWCNTs促纤维化机理的研究
5.1 引言
5.2 实验材料和方法
5.2.1 实验材料
5.2.2 实验方法与步骤
5.2.2.1 RAW264.7细胞与NIH 3T3细胞共培养
5.2.2.2 PCR法检测NIH 3T3细胞纤维化相关基因mRNA水平表达
5.3 实验结果及讨论
5.3.1 Long MWCNTs促进胶原产生具有TGF-β/Smad信号通路依赖性
5.3.2 TGF-β是Long MWCNTs促进胶原产生的关键因素
5.4 本章小结
第六章 全文总结
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
个人简历
本文编号：3807615
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
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中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 碳纳米管概述
1.2 由呼吸道进入的碳纳米管在机体内的分布
1.3 碳纳米管的促纤维化作用及相关机理研究
1.3.1 单壁碳纳米管促纤维化作用
1.3.2 多壁碳纳米管促纤维化作用
1.4 碳纳米管促纤维化机理的研究
1.4.1 对巨噬细胞的作用
1.4.2 对上皮细胞的作用
1.4.3 对成纤维细胞的作用
1.5 TGF-β信号通路
1.5.1 TGF-β信号通路的生物效应
1.5.2 TGF-β与纤维化及炎症反应疾病的关系
第二章 多壁碳纳米管的化学表征
2.1 引言
2.2 实验材料和方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 主要仪器
2.2.3 实验方法
2.2.3.1 TEM表征两种多壁碳纳米管的形貌
2.3 实验结果及讨论
第三章 MWCNTs对巨噬细胞作用的研究
3.1 引言
3.2 实验材料和方法
3.2.1 实验材料
3.2.1.1 主要试剂的配制
3.2.2 实验方法与步骤
3.2.2.1 RAW264.7细胞培养
3.2.2.2 RAW264.7细胞活性测定
3.2.2.3 PCR法测定RAW264.7细胞功因子mRNA
3.2.2.4 用Elisa法测定RAW264.7细胞功能因子表达
3.3 实验结果及讨论
3.3.1 Short MWCNTs、Long MWCNTs对RAW264.7细胞活性影响
3.3.2 MWCNTs对RAW264.7细胞TGF-β表达的影响
3.3.2.1 MWCNTs上调RAW264.7细胞中TGF-βmRNA水平表达
3.3.2.2 MWCNTs上调RAW264.7细胞TGF-β蛋白水平表达
3.3.3 MWCNTs对RAW264.7细胞TNF-α表达的影响
3.3.3.1 MWCNTs上调RAW264.7细胞TNF-αmRNA水平表达
3.3.3.2 MWCNTs上调RAW264.7细胞TNF-α蛋白水平表达
3.4 本章小结
第四章 MWCNTs对成纤维细胞的研究
4.1 引言
4.2 实验材料和方法
4.2.1 实验材料
4.2.1.1 主要试剂的配制
4.2.2 实验方法与步骤
4.2.2.1 NIH 3T3细胞的培养
4.2.2.2 NIH 3T3细胞活性的测定
4.2.2.3 免疫印迹(Western-blotting)法
4.3 实验结果及讨论
4.3.1 Short MWCNTs、Long MWCNTs对NIH3T3细胞活性影响
4.3.2 Short MWCNTs、Long MWCNTs上调NIH3T3 cell中a-SMA蛋白的表达
4.3.3 Long M WCNTs促进NIH3T3细胞中TGF-β/Smad信号通道的激活
4.4 本章小结
第五章 MWCNTs促纤维化机理的研究
5.1 引言
5.2 实验材料和方法
5.2.1 实验材料
5.2.2 实验方法与步骤
5.2.2.1 RAW264.7细胞与NIH 3T3细胞共培养
5.2.2.2 PCR法检测NIH 3T3细胞纤维化相关基因mRNA水平表达
5.3 实验结果及讨论
5.3.1 Long MWCNTs促进胶原产生具有TGF-β/Smad信号通路依赖性
5.3.2 TGF-β是Long MWCNTs促进胶原产生的关键因素
5.4 本章小结
第六章 全文总结
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
个人简历
本文编号：3807615
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