人脐带间充质干细胞复合nHA/PA66支架材料的骨组织工程实验研究

发布时间：2023-05-07 19:18

　　因外伤、感染、肿瘤等因素造成骨缺损是骨科临床常见疾病。较小范围的骨缺损可以由机体自身的再生得到修复,大范围骨缺损由于成骨细胞难以越过而不能正常愈合,若不采用适当治疗则最终仅由纤维组织充填,形成骨不连。而大范围骨缺损的修复目前仍是临床上难以完全解决的问题。目前常用的有自体骨移植、异体／异种骨移植、人工合成骨替代品等方法修复骨缺损,都有其优缺点。骨组织工程学是利用组织工程原理对骨缺损进行修复和重建的一门学科,近年来,将种子细胞与特定支架材料复合,在体外构建具有生命的活性组织工程化复合材料是骨组织工程学研究的热点。本实验根据骨组织工程学基本原理,培养人脐带间充质干细胞,成骨诱导后复合纳米羟基磷灰石／聚酰胺66支架材料,植入裸鼠体内观察其成骨的情况,为进一步建立骨组织工程的动物模型及满足治疗骨缺损的临床需要提供理论基础。 第一章脐带间充质干细胞的提取、分离、纯化增殖及生物学特性 目的研究探讨人脐带间充质干细胞的分离、培养、增殖方法,并研究其生物学特性,以期将其作为骨组织工程种子细胞。 方法取足月妊娠剖宫产健康胎儿的脐带,D-Hank’s液充分洗涤,将脐带剪碎至1mm3大小组织块,运用胶原酶消化...

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

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前言
第一章 人脐带间充质干细胞的提取、分离、纯化增殖及生物学特性
    1.1 材料和方法
        1.1.1 材料、主要试剂和仪器
        1.1.2 实验方法与步骤
    1.2 结果
        1.2.1 人脐带间充质干细胞的形态特征
        1.2.2 细胞表面抗原检测结果
        1.2.3 细胞生长与增殖曲线
    1.3 讨论
    1.4 结论
    附图
第二章 人脐带间充质干细胞的体外成骨诱导分化
    2.1 材料与方法
        2.1.1 主要试剂与仪器
        2.1.2 实验方法与步骤
        2.1.3 统计学处理
    2.2 结果
        2.2.1 hUCMSCs成骨诱导后细胞形态特征及H-E染色表现
        2.2.2 碱性磷酸酶染色及含量测定
        2.2.3 钙结节茜素红染色
        2.2.4 RT-PCR检测OPN、OCN、ALP的mRNA的表达情况
        2.2.5 免疫组织化学及Western blotting检测Ⅰ型胶原蛋白表达
    2.3 讨论
    2.4 结论
    附图
第三章 人脐带间充质干细胞与nHA/PA66复合支架生物相容性的体外实验研究
    3.1 材料与方法
        3.1.1 主要试剂与仪器
        3.1.2 实验方法与步骤
        3.1.3 统计学方法
    3.2 结果
        3.2.1 人脐带间充质干细胞复合nHA/PA66支架材料观察及支架理化性质
        3.2.3 碱性磷酸酶定量检测结果
        3.2.4 生长曲线测定
        3.2.5 nHA/PA66支架材料细胞粘附率测试结果
        3.2.6 细胞毒性测试结果
        3.2.7 RT-PCR检测OPN、OCN、ALP结果
    3.3 讨论
        3.3.1 支架材料的研究现状
        3.3.2 种子细胞与生物支架材料的生物相容性评价
    3.4 结论
    附图
第四章 人脐带间充质干细胞复合nHA/PA66支架异位成骨作用的实验研究
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料与主要试剂与仪器
        4.1.2 实验方法与步骤
    4.2 结果
        4.2.1 大体观察
        4.2.2 组织学观察:H-E染色及骨钙素蛋白免疫组化结果
        4.2.3 电镜扫描结果
    4.3 讨论
    4.4 结论
    附图
参考文献
综述
    参考文献
致谢
读博期间发表论文情况



本文编号：3811178