LCC支架材料的制备及其在人体正常肝细胞L-02培养中的应用

发布时间：2017-05-24 18:24

  本文关键词：LCC支架材料的制备及其在人体正常肝细胞L-02培养中的应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肝脏是人体重要的器官之一，然而每年都会有大量的人因为肝癌、急性肝衰竭死亡，肝移植是目前最好的医治方法，寻找合适的支架材料是利用自身肝细胞进行体外人工肝脏的基础行研究工作。木素-碳水化合物复合体（Lignin-carbohydrate complexes，LCC）具有良好的两亲性、生物相容性、无毒性、可降解性等特性，是一种很好的医用高分子材料。本研究对LCC在组织工程中的应用进行了研究。 本文从针叶木（银杏）、阔叶木（杨木）和禾本科（麦草）中提取LCC，然后分离出水可溶性LCC和水不可溶性LCC进行人体正常肝细胞L-02体外培养的研究。 利用FT-IR和液相色谱对水可溶性LCC的化学结构和主要成分含量进行分析，然后将水可溶性LCC进行人体正常肝细胞L-02的培养，利用血细胞计数、倒置相差生物显微镜对细胞的增殖和形态进行观察，并检测肝细胞的代谢活性。研究结果表明：银杏水可溶性LCC中半乳糖和甘露糖组分含量分别为2.05%和28.31%，杨木水可溶性LCC中半乳糖和甘露糖组分含量分别为5.59%和24.5%，，小麦水可溶性LCC中甘露糖组分含量为10.62%，半乳糖含量很低。在培养的第4d，肝细胞增殖最快，细胞数量达到最大值，肝细胞增殖速率为杨木可溶性LCC实验组＞银杏可溶性LCC实验组＞对照组＞小麦可溶性LCC实验组，表明原料中半乳糖和甘露糖含量高更有利于细胞的增殖。肝细胞白蛋白、血尿素氮和葡萄糖代谢活性的测定结果表明与未加入水可溶性LCC实验结果相比，加入水可溶性LCC培养的细胞具有较高的代谢活性。 以银杏和杨木水不溶性LCC为原料，采用冷冻干燥法制备球形生物载体，利用扫描电子显微镜、液相色谱、FT-IR等对制成的生物载体形态、物理和化学性质进行分析，然后将球形生物载体进行进行人体正常肝细胞L-02的培养，利用血细胞计数、倒置相差生物显微镜和扫描电子显微镜对细胞的增殖和形态进行观察，并检测肝细胞的代谢活性。研究结果表明：银杏水不溶性LCC球形生物载体中半乳糖和甘露糖组分含量分别为3.30%和21.94%、3.82%和25.25%，杨木水不溶性LCC球形生物载体中半乳糖和甘露糖组分含量分别为3.82%和25.25%，制备的银杏和杨木水不溶性LCC球形生物载体的比表面积分别为17m2/g和9m2/g球形载体生物的干球直径为1.8mm~2.0mm。在培养的第5d，肝细胞增殖最快，细胞数量达到最大值，在倒置相差生物显微镜和扫描电子显微镜下，发现球形生物载体上成功地黏附有许多人肝细胞L-02，且在杨木球形生物额载体上生长的肝细胞数比银杏球形生物载体上生长的细胞数多，肝细胞增殖速率和ALB、BUN、GLU代谢活性为杨木水不溶性LCC实验组＞银杏水不溶性LCC实验组＞对照组。LCC是一种良好的医用高分子材料，为LCC在组织工程中的应用奠定了良好的基础。
【关键词】：木素-碳水化合物复合体 生物载体 肝细胞 培养 代谢活性
【学位授予单位】：湖北工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318.08;TQ351.01
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目录8-11
• 第1章 引言11-21
• 1.1 肝组织工程的介绍11
• 1.2 肝组织工程支架材料的基本要求11
• 1.3 天然生物医用高分子材料11-15
• 1.3.1 胶原12
• 1.3.2 丝蛋白12-13
• 1.3.3 壳聚糖13-14
• 1.3.4 纤维素14
• 1.3.5 木素-碳水化合物复合体14-15
• 1.4 木素-碳水化合物复合体与动物细胞的结合能力15-16
• 1.5 天然 LCC 的生理活性和生物相容性16-17
• 1.6 微载体的制备方法17-19
• 1.6.1 冷冻干燥法17
• 1.6.2 反相胶束法17-18
• 1.6.3 乳化交联法18
• 1.6.4 喷雾干燥法18
• 1.6.5 凝聚/沉淀法18
• 1.6.6 离子凝聚法18-19
• 1.7 本研究的目的及主要内容19-21
• 1.7.1 本研究的目的及意义19-20
• 1.7.2 本研究的主要内容20-21
• 第2章 可溶性 LCC 在人肝细胞培养中应用的研究21-41
• 2.1 引言21-22
• 2.2 实验22-28
• 2.2.1 实验试剂与仪器22-23
• 2.2.2 可溶性 LCC 的提取23-25
• 2.2.3 红外光谱检测25
• 2.2.4 成分测定25-26
• 2.2.5 人肝细胞 L-02 体外培养26-27
• 2.2.6 人肝细胞 L-02 的形态观察27
• 2.2.7 人肝细胞代谢活性的检测27-28
• 2.3 结果与讨论28-40
• 2.3.1 红外光谱分析28-30
• 2.3.2 成分分析30
• 2.3.3 人肝细胞 L-02 形态学分析30-36
• 2.3.4 代谢活性检测的结果36-40
• 2.4 本章小结40-41
• 第3章 不溶性 LCC 生物载体的制备及人肝细胞培养的研究41-67
• 3.1 引言41-42
• 3.2 实验42-48
• 3.2.1 实验试剂与设备42-43
• 3.2.2 不溶性 LCC 的分离43
• 3.2.3 不溶性 LCC 球形生物载体的制备43-44
• 3.2.4 球形生物载体材料的 FT-IR 分析44
• 3.2.5 球形生物载体材料成分分析44-45
• 3.2.6 球形生物载体表征45-46
• 3.2.7 不溶性 LCC 球形生物载体在人体正常肝细胞 L-02 的体外培养46-47
• 3.2.8 人体正常肝细胞 L-02 的形态观察47
• 3.2.9 人肝细胞代谢活性的检测47-48
• 3.3 结果与讨论48-65
• 3.3.1 球形生物载体材料 FT-IR 分析48-50
• 3.3.2 球形生物载体材料成分分析50-51
• 3.3.3 球形生物载体的形态分析51-52
• 3.3.4 球形生物载体的直径分析52-53
• 3.3.5 球形生物载体比表面积与孔径分析53-54
• 3.3.6 球形生物载体稳定性分析54
• 3.3.7 LCC 球形生物载体培养的人肝细胞 L-02 形态分析54-61
• 3.3.8 人肝细胞 L-02 代谢活性检测61-65
• 3.4 本章小结65-67
• 结论67-69
• 参考文献69-75
• 致谢75-76
• 附录一 攻读硕士学位间参与的科研及发表的文章76

【参考文献】

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本文编号：391621