基于聚合多巴胺薄膜固定抗凝多肽比伐卢定的研究

发布时间：2017-06-05 14:17

  本文关键词：基于聚合多巴胺薄膜固定抗凝多肽比伐卢定的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：比伐卢定是一种基于水蛭素活性片段人工合成的凝血酶直接抑制剂。作为肝素抗凝治疗的替代药物,有报道比伐卢定在临床治疗中取得了良好的效果。本课题利用聚合多巴胺过度层(DA)在316L医用不锈钢(SS)表面固定比伐卢定(BV),并改善了不锈钢表面的血液相容性。本研究利用傅立叶变换红外光谱(FT-IR)和X射线光电子能谱(XPS)对不同样品的表面化学组成进行定性表征,利用石英晶天平(QCM)对比伐卢定接枝过程进行定量表征,利用接触角仪对样品表面水接触角进行了检测,利用甲苯胺蓝法对样品表面的酸性基团进行了定量检测。体外血液相容性评价包括：1.活化部分凝血酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT),2.血小板的粘附与激活,3.纤维蛋白原的吸附与激活,4.体外全血流动腔实验。此外,本课题对不同灭菌方法对接枝后比伐卢定的生物活性的影响进行了评估。实验结果显示,比伐卢定能够成功的通过聚合多巴胺过渡层固定到不锈钢表面,接枝量约为98ng/cm2。比伐卢定改性涂层相对316L医用不锈钢不锈钢表面,绝大部分接枝类型为共价偶联,存在少部分的静电自组装作用,清洗过程可靠。比伐卢定涂层显著的延长了aPTT和PT,并明显的抑制了血小板和纤维蛋白原的激活。对于比伐卢定涂层,紫外辐照是一种可行的灭菌方法,几乎对多肽活性不产生影响。本课题对这一改性涂层的细胞相容性做了初步的研究,细胞培养后结果表明,相对于316L医用不锈钢表面,比伐卢定涂层对内皮细胞和内皮祖细胞的增殖无明细的抑制或促进作用,在短期培养中细胞铺展较快。对于平滑肌细胞,聚合多巴胺涂层以及比伐卢定涂层对其具有明显的抑制作用。聚合多巴胺表面有抑制由平滑肌快速增殖引起的内膜增生的潜力。综上所述,比伐卢定表面改性是对心血管植入器械表面改性的一种新途径。
【关键词】：血液相容性 316L不锈钢 比伐卢定 聚合多巴胺 多肽固定 细胞相容性
【学位授予单位】：西南交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-12
• 第1章 绪论12-24
• 1.1 研究背景12-18
• 1.1.1 心血管疾病与微创介入治疗12-13
• 1.1.2 心管介入器械与材料13-15
• 1.1.3 心管生物材料表面改性的研究进展15-18
• 1.2 研究内容及方法18-24
• 1.2.1 凝血酶直接抑制剂比伐卢定18-20
• 1.2.2 聚合多巴胺活性涂层研究进展20-22
• 1.2.3 研究的目的与内容22-23
• 1.2.4 课题研究方法23-24
• 第2章 医用不锈钢表面比伐卢定涂层的制备及表征24-34
• 2.1 引言24-25
• 2.2 比伐卢定涂层的制备25-26
• 2.2.1 聚合多巴胺涂层的制备25
• 2.2.2 聚合多巴胺涂层表面固定比伐卢定25-26
• 2.3 表面表征26-28
• 2.3.1 傅里叶变化红外光谱26
• 2.3.2 XPS检测26
• 2.3.3 表面水接触角检测26-27
• 2.3.4 表面酸性基团定量(甲苯胺蓝法)27
• 2.3.5 石英晶天平(QCM)定量检测27-28
• 2.5 结果与讨论28-33
• 2.5.1 红外光谱28-29
• 2.5.2 XPS29-30
• 2.5.3 水接触角30-31
• 2.5.4 酸性基团定量结果31-32
• 2.5.5 QCM实验结果32-33
• 2.6 本章小结33-34
• 第3章 比伐卢定涂层体外血液相容性评价34-45
• 3.1 引言34
• 3.2 实验方法34-38
• 3.2.1. 血小板粘附35
• 3.2.2. 血小板乳酸脱氢酶(LDH)检测35
• 3.2.3. 血小板P选择素(p-selectin)检测35-36
• 3.2.4. 凝血时间检测36
• 3.2.5. 纤维蛋白原吸附36
• 3.2.6. 纤维蛋白原激活36-37
• 3.2.7. 全血体外流动腔实验37-38
• 3.3 结果和讨论38-44
• 3.3.1 血小板粘附实验38-39
• 3.3.2 血小板的粘附与激活定量39-40
• 3.3.3 凝血时间：aPTT与PT40-41
• 3.3.4 纤维蛋白原的粘附与激活定量41-43
• 3.3.5 体外全血流动腔实验43-44
• 3.4 本章小结44-45
• 第4章 比伐卢定接枝稳定性的研究45-51
• 4.1 引言45-46
• 4.2 实验方法46-47
• 4.2.1 物理吸附检测46
• 4.2.2 静电吸附检测46
• 4.2.3 比伐卢定涂层的灭菌活性检测46-47
• 4.3 结果与讨论47-50
• 4.3.1 物理吸附47
• 4.3.2 静电吸附47-48
• 4.3.3 灭菌稳定性48-50
• 4.4 本章小结50-51
• 第5章 细胞相容性研究51-59
• 5.1 引言51
• 5.2 实验方法51-54
• 5.2.1 人类内皮细胞培养实验52
• 5.2.2 人类平滑肌细胞培养实验52
• 5.2.3 小鼠内皮祖细胞培养实验52-53
• 5.2.4 细胞形态观察53-54
• 5.3 结果与讨论54-58
• 5.3.1 内皮细胞54-55
• 5.3.2 平滑肌细胞55-56
• 5.3.3 内皮祖细胞56-58
• 5.4 本章小结58-59
• 结论59-61
• 致谢61-62
• 参考文献62-69
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文及科研成果69

【参考文献】

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