脂肪干细胞与丝蛋白—壳聚糖材料生物相容性的初步研究

发布时间：2017-06-16 03:02

  本文关键词：脂肪干细胞与丝蛋白—壳聚糖材料生物相容性的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分丝蛋白-壳聚糖支架的制备及其特性测定 研究目的： 探索一种更接近皮肤的组织工程支架材料,本实验拟采用溴化锂-水溶丝体系溶解丝素蛋白,制备丝素蛋白-壳聚糖共混支架。 方法： 采用了溴化锂-水溶丝体系溶解丝素蛋白,降低丝素蛋白分子的降解,将溶解壳聚糖的醋酸浓度减小到更低水平,以防止混合过程中的丝素蛋白分子的过快变性。本实验共制备了纯SF以及SF/CS比例3：1,6：1,9：1的共混材料。扫描电镜(SEM)观察制备的共混支架材料的表观和断而形态；Image J测量各支架孔径；测定各支架吸水率；通过电子拉力机对所制备材料的力学性能进行测试。 结果： SEM观察到材料为内部多孔的海绵状结构,断面均匀且没有宏观分相的情况出现。随着SF的浓度增大,所制备的SF/CS共混支架材料的孔径大小从120±18.2um逐渐减小到52.1±4.8gm。纯的SF支架则需要大于5min的时间；而不同比例的SF/CS共混支架材料在1-3min都达到了溶胀平衡。机械强度测试提示SF/CS多孔共混支架材料均具有较好的断裂强度和一定的柔韧性能,纯SF材料的强度最大,为430±54kPa。 结论： 采用溴化锂-水溶丝体系将丝素蛋白和壳聚糖进行共混,共混支架材料具备较好的力学性能,在SEM的断面图上没有出现宏观的组分间相分离；吸水速率大幅度提升；机械强度测试提示SF/CS多孔共混支架材料均具有较好的断裂强度和一定的柔韧性能。 第二部分脂肪干细胞的分离、培养、鉴定 研究目的： 从SD大鼠腹股沟处脂肪提取脂肪干细胞,了解脂肪干细胞是否具有多向分化的潜能。 方法： 自SD大鼠(7周龄,体重190+21.4g)的大鼠双侧腹股沟处切取脂肪组织约5g,经常规酶消化法提取脂肪干细胞,观察其细胞形态,并绘制生长曲线；采用单克隆抗体标记ADSCs,然后采用流式细胞仪测定十细胞表面标志物CD29、CD34、CD44、CD90;通过诱导分化剂的诱导,将ADSCs诱导分化成脂、成骨,通过油红“O”染色、茜素红染色和Von kussa染色了解干细胞成脂、成骨情况。 结果： SD大鼠腹股沟脂肪分离培养的细胞,具有干细胞的形态和特性,经流式细胞仪检测其表面标志物的表达为CD29,CD44, CD90呈阳性表达,阳性率分别为93%,98%,96%,而CD34表达呈阴性表达(0%)：经定向诱导,发现ADSCs具有成脂、成骨多向分化的潜能。 结论： 脂肪十细胞(ADSCs)分离培养简单,获取容易,具有较好干细胞特性,传代稳定。 第三部分脂肪干细胞与丝蛋白-壳聚糖材料体外培养和生物学活性的研究 研究日的： 采用溴化锂-水溶丝体系制备的纯SF及SF/CS比例3：1,6：1,9：1的共混材料,与ADSCs共培养,观察不同支架上ADSCs的生长状态及增殖情况。 方法： ADSCs与纯SF及SF/CS共混材料共培养,分别在细胞培养的第1、3、7、10d时间CCK-8测定细胞增殖情况,第10d时,trizol法提取支架上细胞的RNA,用RT-PCR法检测其Ki67的表达量。将细胞浓度为5×104/ml的ADSCs与材料在体外共同培养,电镜下观察ADSCsl均生长情况。 结果： ADSCs在第1、3、7、10dd增值过程中,SF/CS共混材料3：1组最接近对照组,在第1、3、7、10d其增值速度明显快于6：1组,9：1组及纯SF组,其中纯SF组ADSCs增殖速度最慢, P0.05,差别有显著性。RT-PCR结果提示SF/CS比例3：组相对定量值为1.27±0.46,6：1组为0.74±0.23,9：1组为0.67±0.31,纯SF组为0.43±0.19。ADSCs在SF/CS共混材料上培养的第3d,扫描电镜观察提示,细胞形态呈长梭形,表面光滑,形态完整,伸出较多足突与SF/CS共混材料黏附紧密。 结论： SF/CS共混材料与ADSCs生物相容性好,其中3：1组ADSCs增值速率明显高十6：1组,9：1组及纯SF组。
【关键词】：脂肪干细胞 丝蛋白 壳聚糖 生物相容性
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 缩略语5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 引言14-17
• 第一部分：丝蛋白-壳聚糖支架的制备及其特性鉴定17-30
• 摘要17-19
• 实验材料与试剂19-20
• 实验方法20-23
• 结果23-27
• 讨论27-29
• 小结29-30
• 第二部分 ：脂肪干细胞的分离、培养、鉴定30-46
• 摘要30-32
• 实验材料与试剂32-34
• 实验方法34-38
• 结果38-43
• 讨论43-45
• 小结45-46
• 第三部分 ：脂肪干细胞与丝蛋白-壳聚糖材料相容性研究46-61
• 摘要46-48
• 实验材料与试剂48-50
• 实验方法50-55
• 结果55-58
• 讨论58-60
• 小结60-61
• 参考文献61-66
• 全文总结66-67
• 综述67-76
• 参考文献73-76
• 致谢76-78
• 研究生阶段发表的论文78-79

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;In vitro differentiation of human adipose-derived mesenchymal stem cells into endothelial-like cells[J];Chinese Science Bulletin;2006年15期

  本文关键词：脂肪干细胞与丝蛋白—壳聚糖材料生物相容性的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：454181