采用混合阳离子交联剂制备甲基丙烯酸海藻酸盐凝胶小球及其对软骨细胞增殖影响的研究

发布时间：2017-07-18 16:12

  本文关键词：采用混合阳离子交联剂制备甲基丙烯酸海藻酸盐凝胶小球及其对软骨细胞增殖影响的研究

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【摘要】：本研究旨在探索一种适合软骨细胞增殖的三维培养载体,从而更好地应用于软骨组织工程领域。方法：1)采用Ca2+:Ba2+=5:5作为阳离子交联剂,与甲基丙烯酸藻酸盐(MA)混合,利用光反应制备凝胶小球。以藻酸钙做对照组,测定其渗透性和压缩模量。2)分离兔膝关节软骨细胞的、并体外培养。当软骨细胞贴壁后长至70-80%时用EDTA-胰酶消化传代至P1代。3)将甲基丙烯酸海藻酸盐和P1代软骨细胞复合后与Ca2+:Ba2+=5:5(?)昆合阳离子交联制备凝胶小球,并对软骨细胞体外三维培养进行表征。以藻酸钙做对照组,在不同时间点进行倒置显微镜下观察、组织学检测、扫描电镜下观察、细胞活性及增殖的检测、软骨细胞分泌细胞外基质检测,并用II型胶原免疫组化染色对其表型进行鉴定。结果：1)通过光交联反应成功制备出MA凝胶小球,该凝胶的压缩模量明显高于藻酸钙对照组,凝胶小球的渗透性与对照组无显著差异。说明该凝胶小球强度有所提高,但渗透性并没有明显下降。2)从兔膝关节软骨中成功分离出软骨,培养出原代软骨细胞并传代至P1代。3)将软骨细胞包裹进甲基丙烯酸海藻酸盐凝胶小球和藻酸钙小球并进行三维培养,倒置显微镜下发现,随着时间的推移,两组小球内的软骨细胞不断增殖,第14天开始出现细胞簇,在第21天可以观察到MA凝胶小球内的细胞簇较藻酸钙组更多；第21天扫描电镜下可以观察到两组凝胶小球内软骨细胞均贴附在支架表面生长,软骨细胞呈圆形；组织学染色显示,两组凝胶小球内软骨细胞均匀分布在小球中,细胞不断增殖并逐渐成细胞簇,MA凝胶小球组细胞簇聚集更明显；免疫组化染色显示第21天MA组II型胶原免疫组化染色呈阳性；Alamar blue法测定细胞增殖结果显示在培养的21天内,两组小球内软骨细胞不断增殖,MA凝胶小球组细胞增殖比藻酸钙组更加明显,两者具有统计学差异；细胞外基质GAG含量的测定结果显示在培养的21天内两组凝胶小球内软骨细胞分泌的GAG不断增加,第21天MA凝胶小球组GAG含量明显高于藻酸钙组,具有统计学差异。结论：以混合阳离子作为交联剂与甲基丙烯酸海藻酸盐通过光反应制备的三维培养载体更适合软骨细胞三维培养。
【关键词】：甲基丙烯酸海藻酸盐 光交联反应 三维培养 阳离子交联剂 凝胶小球 软骨细胞
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 前言8-10
• 文献回顾10-13
• 第一部分 光交联反应制备混合阳离子交联剂甲基丙烯酸海藻酸盐微球及其性能研究13-20
• 1.1 实验材料及溶液配制13-14
• 1.2 实验方法14-16
• 1.3 结果16-18
• 1.4 讨论18-20
• 第二部分 混合阳离子交联剂甲基丙烯酸海藻酸盐三维培养软骨细胞的实验研究20-31
• 2.1 实验材料及溶液配制20-21
• 2.2 实验方法21-22
• 2.3 实验观察22-23
• 2.4 结果23-29
• 2.5 讨论29-31
• 结论31-32
• 参考文献32-36
• 在学期间的研究成果36-37
• 致谢37-38
• 附录一 中英文缩略词38

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：558570