膜离子通道阻滞及细胞骨架破坏对拉伸应力刺激兔关节软骨细胞代谢的影响

发布时间：2017-07-26 05:23

  本文关键词：膜离子通道阻滞及细胞骨架破坏对拉伸应力刺激兔关节软骨细胞代谢的影响

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【摘要】：目的：探讨在拉伸应力作用下,膜离子通道阻滞剂和CSK(细胞骨架)破坏剂对离体培养兔膝关节软骨细胞代谢的影响。 方法：2月龄新西兰大白兔10只,无菌条件下分离培养双膝关节软骨细胞,且将其随机分为8组,对照组、微管破坏组、微丝破坏组、中间纤维破坏组、Na+通道阻滞组、K+通道阻滞组、Ca2+通道阻滞组、Cl-通道阻滞组。在拉伸应力(拉伸率为10%,频率为0.5Hz,正弦波,6h/D)作用下加载3天后,分别加入离子通道阻滞剂(Na+、K+、Ca2+及Cl-通道阻滞剂)和细胞骨架破坏剂(微管破坏剂、微丝破坏剂及中间纤维破坏剂),37℃培育3d。采用HE染色观察其形态；ELASA法(酶联免疫吸附测定法)检测各组细胞培养上清液中MMP-13(基质金属蛋白酶-13)、TIMP-1(金属蛋白酶组织抑制剂-1)的含量；阿尔新蓝染色法检测各组培养液中GAG的含量；RT-PCR的方法检测各组细胞中Col-Ⅱ (Ⅱ型胶原)、MMP-3(基质金属蛋白酶-3)、TIMP-1、Actin(肌动蛋白)、Tubulin(微管蛋白)、Vimentin(波形蛋白)mRNA的相对表达量。 结果：与对照组相比,细胞骨架破坏组及离子通道阻滞组软骨细胞形态均出现排列不均匀,形态各异,细胞核深染,大小不一,细胞质减少等现象；且细胞骨架破坏组上清液中GAG浓度均较对照组降低,有统计学意义(P0.05)；蛋白水平检测显示,微丝、中间纤维破坏组MMP-13浓度较对照组降低,有统计学意义(P0.05),中间纤维破坏组TIMP-1浓度较对照组明显上升,有统计学意义(P0.05); Ca2+、Cl-离子通道阻滞组GAG浓度较对照组降低,有统计学意义；K+、Cl-通道阻滞组MMP-13浓度较对照组均降低,有统计学意义(P0.05)；基因水平检测结果与蛋白水平检测结果一致；各实验组软骨细胞Col-Ⅱ mRNA相对表达量均下调,有统计学意义(P0.05)。 结论：在拉伸应力作用下,破坏CSK和阻滞离子通道均使软骨细胞发生退化,其中细胞骨架蛋白和Na+、Cl-通道可能与软骨细胞基质的合成代谢密切相关。
【关键词】：细胞骨架 膜离子通道 拉伸应力 软骨细胞
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 中英文对照表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-20
• 结果20-33
• 讨论33-36
• 结论36-37
• 参考文献37-39
• 综述39-53
• 参考文献48-53
• 个人简历53
• 研究生期间发表论文53-54
• 致谢54

【参考文献】

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本文编号：574895