MGF纳米微球静电纺丝材料对人骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

发布时间：2017-07-31 22:14

  本文关键词：MGF纳米微球静电纺丝材料对人骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

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【摘要】：载体支架、种子细胞、生物活性因子已成为组织工程三大重要因素。本课题以Yang等发现并命名的细胞对力刺激响应的产物——力生长因子（mechano-growth factor，MGF）为生物活性因子，采用静电纺丝技术（electrospinning）及相分离法制备了基于聚已内酯（polycaprolactone，PCL）的含MGF的葡聚糖纳米微球的纤维支架，采用从人的骨髓中提取的间充质干细胞（human bone mesenchymalstem cells，hBMSC）为种子细胞，从hBMSC生物学行为的差异来研究葡聚糖微球对MGF生物活性的保护作用。 本课题主要包括以下几方面的内容： ①hBMSC原代分离培养及鉴定 利用密度梯度离心法，分离培养hBMSCs，观察细胞形态，采用CD34、CD73、CD14、CD90和CD105抗体荧光染色后流式细胞仪检测细胞表面标志，，同时检测细胞周期状态，确定细胞纯度；使用脂肪分化、成骨分化诱导培养基诱导细胞多向分化，证实细胞的多向分化潜能，为后续的细胞实验提供种子细胞支持。 ②MGF纳米微球的制备和表征 采取相分离法制备空微球和含MGF的纳米微球（MGF-Loaded dextran glassynanoparticles，MGF-DGNs），并采用场发射扫描电镜观察微球形态，为后续电纺纤维支架做准备。 ③静电纺丝材料的制备和表征 采用静电纺丝技术，制备四种纤维支架，分别是单纯PCL溶液电纺（P）；加200μgMGF水溶液于PCL溶液中搅拌均匀后电纺（PM）；PCL溶液中加100mg葡聚糖空微球搅拌均匀后电纺（PD）；加100mg含了200μgMGF的葡聚糖微球到PCL溶液中搅拌均匀后电纺（PDM）。并通过场发射扫描电镜（FESEM）、透射电镜（TEM）、傅里叶红外光谱（FTIR）、比表面积及孔隙度分析仪等表征手段检测支架的表面形貌及理化性质。 ④MGF对hBMSC生物学行为的影响 在P、PM、PD、PDM四种不同的纤维支架上分别种植hBMSC，采用酶标仪和激光共聚焦显微镜（CLSM），观察细胞在材料表面的增殖与迁移情况，检测材料中释放的MGF对hBMSC生物学行为的影响。 本课题研究结果表明含MGF的纳米微球支架能够显著促进hBMSC增殖和迁移，荧光实时定量PCR检测在PDM材料上面的hBMSC中MGF高表达。此静电纺丝纳米纤维能够较好的保护MGF的活性，有望在组织工程领域得到应用。
【关键词】：力生长因子 人骨髓间充质干细胞 纳米微球 纳米材料 组织工程
【学位授予单位】：重庆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 1 绪论9-19
• 1.1 问题的提出9-10
• 1.2 国内外研究现状10-17
• 1.2.1 力生长因子研究进展10-15
• 1.2.2 可降解高分子微球缓释载体研究进展15-16
• 1.2.3 人骨髓间充质干细胞研究进展16-17
• 1.3 本文研究的目的、意义及主要内容17-19
• 1.3.1 研究目的及意义17
• 1.3.2 研究内容17-19
• 2 人骨髓间充质干细胞分离、培养及鉴定19-26
• 2.1 引言19
• 2.2 仪器和材料19-21
• 2.2.1 实验仪器19-20
• 2.2.2 实验材料20
• 2.2.3 主要试剂的配制20-21
• 2.3 实验方法21-22
• 2.3.1 人骨髓间充质干细胞分离、培养21
• 2.3.2 人骨髓间充质干细胞特性分析21-22
• 2.3.3 人骨髓间充质干细胞分化能力的检测22
• 2.4 结果与分析22-25
• 2.4.1 骨髓间充质干细胞的形态观察22-23
• 2.4.2 骨髓间充质干细胞的表型鉴定23-25
• 2.5 本章小结25-26
• 3 纳米微球的制备及表征26-29
• 3.1 引言26
• 3.2 仪器和材料26-27
• 3.2.1 实验仪器26-27
• 3.2.2 实验材料27
• 3.3 实验方法27
• 3.3.1 纳米微球的制备27
• 3.3.2 纳米微球的表征27
• 3.4 结果与分析27-28
• 3.5 本章小结28-29
• 4 MGF 纳米微球静电纺丝材料的制备及表征29-38
• 4.1 引言29-30
• 4.2 仪器和材料30-31
• 4.2.1 实验仪器30
• 4.2.2 实验材料30
• 4.2.3 主要试剂的配制30-31
• 4.3 实验方法31-32
• 4.3.1 静电纺丝纤维支架的制备31
• 4.3.2 场发射扫描电镜观察31
• 4.3.3 透射电镜观察31
• 4.3.4 傅里叶红外光谱检测31
• 4.3.5 材料厚度检测31
• 4.3.6 比表面积及孔隙率检测31
• 4.3.7 数据分析31-32
• 4.4 结果与分析32-36
• 4.4.1 材料表面形态32-33
• 4.4.2 材料物理性质33-34
• 4.4.3 比表面积及孔隙度分析34-36
• 4.4.4 材料厚度分析36
• 4.5 本章小结36-38
• 5 静电纺丝材料对人骨髓间充质干细胞生物学行为的影响38-47
• 5.1 引言38
• 5.2 仪器和材料38-39
• 5.2.1 实验仪器38-39
• 5.2.2 实验材料39
• 5.3 实验方法39-42
• 5.3.1 扫描电镜观察39-40
• 5.3.2 免疫荧光染色40
• 5.3.3 细胞增殖分析40
• 5.3.4 细胞浸润分析40-41
• 5.3.5 RT-qPCR 检测 MGF 表达41-42
• 5.3.6 数据分析42
• 5.4 结果与分析42-46
• 5.4.1 细胞表面形貌观察42-44
• 5.4.2 细胞增殖检测44
• 5.4.3 细胞迁移分析44-45
• 5.4.4 RT-qPCR 检测 MGF 表达45-46
• 5.5 本章小结46-47
• 6 结论与展望47-49
• 6.1 主要结论及创新47-48
• 6.2 后续工作展望48-49
• 致谢49-50
• 参考文献50-57
• 附录57-58
• A. 缩略语表57-58
• B. 作者在攻读硕士学位期间科研及发表的论文目录58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 郎景和;;关于子宫内膜异位症的再认识及其意义[J];中国工程科学;2009年10期

2 钱宇娜;李林昊;蒋超;吕永钢;钟莉;杨力;;静电纺丝天然-人工合成聚合物复合纳米纤维及其对细胞黏附、增殖和迁移的影响[J];功能材料;2012年18期

3 王林山;微胶囊技术及其在食品工业中的应用[J];冷饮与速冻食品工业;2004年02期

4 Ahmed A.Taha;;Preparation and application of amino functionalized mesoporous nanofiber membrane via electrospinning for adsorption of Cr~(3+) from aqueous solution[J];Journal of Environmental Sciences;2012年04期

5 张兵兵;王远亮;杨力;潘长江;傅亚;邓墨渊;李玉筱;;力生长因子及其E肽对成骨细胞分化的影响[J];生物化学与生物物理进展;2010年03期

6 张兵兵;江鹏;鲜成玉;李玉筱;李大军;唐丽灵;王远亮;;力生长因子在大肠杆菌中的表达及活性分析[J];生物工程学报;2008年07期

7 张冰玉;宋关斌;罗庆;杨力;;力生长因子的表达及其在组织修复与再生中的作用[J];中国修复重建外科杂志;2012年05期

8 ;竺琦完美游戏彻底娱乐[J];新华航空;2008年01期

本文编号：601341