氯化镧对氧化铝陶瓷颗粒诱导RAW264.7细胞释放炎症细胞因子影响的实验研究

发布时间：2017-08-05 03:08

  本文关键词：氯化镧对氧化铝陶瓷颗粒诱导RAW264.7细胞释放炎症细胞因子影响的实验研究

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【摘要】：目的： 通过观察氯化镧对氧化铝陶瓷颗粒诱导RAW264.7细胞分泌炎症细胞因子（IL-1β、TNF-α)表达的影响，探讨氧化铝陶瓷颗粒与无菌性炎症的关系以及氯化镧对该关系的影响，为氯化镧作用于磨损颗粒诱导的人工关节无菌性松动提供理论和实验依据。 方法： 体外培养小鼠RAW264.7细胞。根据培养液的不同，实验分四组8小组：空白对照组（A组），，陶瓷颗粒组（B组），陶瓷颗粒+不同浓度氯化镧组（C组2.5μmol/L，D组10μmol/L，E组100μmol/L），不同浓度氯化镧组（F组2.5μmol/L、G组10μmol/L、H组100μmol/L）。分组处理48h后，运用MTT法检测细胞生长情况；ELISA、RT-PCR及western blot法在基因和蛋白水平检测炎症因子IL-1β、TNF-α、NF-κB的表达情况。 结果： MTT结果显示各组之间未见明显差异（P0.05）。与空白对照组（A组）相比，陶瓷颗粒组（B组）和100μmol/L （H组）的IL-1β、TNF-αmRNA和蛋白表达水平明显增高（P 0.01）；而2.5umol/L氯化镧（F组）和10umol/L氯化镧（G组）与空白对照组（A组）相比未见明显差异（P0.05）。陶瓷颗粒组（B组）在加入2.5μmol/L（C组），10μmol/L（D组）氯化镧后，IL-1β、TNF-α mRNA和蛋白表达明显降低（P0.05）；而加入100μmol/L （E组）未见明显作用（P0.05）。空白对照组（A组）、2.5μmol/L氯化镧（F组）、10μmol/L氯化镧（G组）三组的IL-1β、TNF-αmRNA和蛋白表达低于100μmol/L氯化镧（H组）（P 0.05）。另外我们也对NF-κB的mRNA基因和蛋白表达进行了检测，发现其变化与炎症因子结果大致相同。 结论： （1）氧化铝陶瓷颗粒对RAW264.7细胞增殖无明显影响，但可刺激RAW264.7细胞分泌IL-1β、TNF-α，促进细胞内NF-κB的表达；（2）氯化镧对磨损颗粒诱导的无菌性炎症呈浓度相关性。2.5μmol/L、10μmol/L氯化镧可明显抑制氧化铝陶瓷颗粒对RAW264.7细胞释放炎症因子IL-1β、TNF-α，并可抑制NF-κB的表达，100μmol/L氯化镧不仅未见明显抑制作用，甚至促进炎症因子IL-1β、TNF-α的释放及NF-κB的表达（3）氯化镧的炎症抑制作用可能与NF-κB信号转导通路有关。
【关键词】：氯化镧 氧化铝陶瓷颗粒 TNF-α IL-1β NF-κB
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料与方法12-28
• 2.1 材料12-15
• 2.1.1 细胞株来源12
• 2.1.2 试剂及其配制方法12-14
• 2.1.3 主要仪器与设备14-15
• 2.2 方法15-26
• 2.2.1 细胞培养15-17
• 2.2.2 实验分组17
• 2.2.3 MTT 比色试验检测细胞活性17-18
• 2.2.4 ELISA 法检测 IL-1β、TNF-α蛋白分泌情况18-19
• 2.2.5 RT-PCR 法检测 IL-1β、TNF-α、NF-κB mRNA 基因的表达19-23
• 2.2.6 Western blot 检测 NF-κB 蛋白的表达情况23-26
• 2.3 统计学处理26-27
• 附图27-28
• 第3章 结果28-33
• 3.1 MTT 比色试验检测细胞活性28
• 3.2 氯化镧对 IL-1Β、TNF-Α蛋白分泌的影响28-29
• 3.3 氯化镧对各组 IL-1Β、TNF-Α、NF-ΚBMRNA 表达的影响29-31
• 3.4 氯化镧对各组 NF-ΚB 蛋白含量的影响31-33
• 第4章 讨论33-37
• 4.1 磨损颗粒与人工关节假体周围骨溶解33-34
• 4.2 RAW264.7 细胞与人工关节假体周围骨溶解34
• 4.3 NF-ΚB 与人工关节假体周围骨溶解34-36
• 4.4 LACL3的作用与剂量之间的关系36
• 4.5 小结36-37
• 第5章 结论37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 攻读学位期间的研究成果43-44
• 综述44-51
• 参考文献49-51

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本文编号：622891