兔纤维环细胞复合KLD-12多肽纳米纤维凝胶体外三维培养的实验研究

发布时间：2017-08-10 03:07

  本文关键词：兔纤维环细胞复合KLD-12多肽纳米纤维凝胶体外三维培养的实验研究

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【摘要】：目的探讨兔纤维环细胞复合KLD-12多肽纳米纤维凝胶体外培养的可能性,寻找修复椎间盘退变的理想种子细胞和支架。方法胰蛋白酶消化法提取6月龄新西兰大白兔纤维环细胞,培养至第3代,复合于KLD-12多肽制备KLD-12多肽/纤维环细胞凝胶。倒置显微镜观察凝胶内细胞形态变化;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞增殖活性;钙黄绿素(Calcein-AM)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双荧光染色观察凝胶内活、死细胞,计算活细胞比率;阿尔新蓝法检测培养基中糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量;免疫荧光染色观察Ⅱ型胶原分泌情况;实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR)检测纤维环细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖(Aggrecan)基因表达情况。结果复合于凝胶中的纤维环细胞呈圆形,少部分在凝胶边缘处贴壁的细胞呈多角形。CCK-8结果显示,细胞增殖活性随培养时间延长呈增加趋势,培养14 d活性显著高于其余各时间点(P0.05),且各时间点活性均显著高于空白凝胶对照组(P0.05)。Calcein-AM/PI双荧光染色观察示,培养5、14 d凝胶内细胞活细胞比率分别89.32%±8.58%和97.81%±1.09%,比较差异无统计学意义(t=—1.962,P=0.097)。GAG检测示,细胞中GAG含量随培养时间延长逐渐增加,8 d达峰值,之后逐渐下降;培养5、8、11 d时GAG含量显著高于2、14 d时(P0.05)。免疫荧光染色示细胞中Ⅱ型胶原正常分泌。RT-q PCR检测示,培养5、14 d凝胶内纤维环细胞均可见Ⅱ型胶原和Aggrecan基因表达,14 d时基因相对表达量均显著高于5 d时(P0.05)。结论纤维环细胞能够在KLD-12多肽纳米纤维凝胶中正常生长增殖,主要细胞外基质成分可正常表达,细胞生物活性良好。
【作者单位】： 石河子大学医学院;石河子大学医学院附属第一医院骨三科;
【关键词】： 椎间盘退变 组织工程 纤维环细胞 KLD-多肽 兔
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81160224,81560363) 兵团博士基金资助项目(2011BB017)~~
【分类号】：R318.08;R681.53
【正文快照】： 腰椎间盘退变是引发下腰部疼痛的主要病因[1];其主要病理表现为髓核、纤维环等椎间盘组织中细胞凋亡、细胞减少,组织含水量及蛋白多糖等细胞外基质含量减少[2-4]。纤维环细胞是构成纤维环组织的细胞,其生物学特性与髓核细胞类似[5],且在体外培养时稳定性较髓核细胞更强[6],因

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

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【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 易强英;刘康;冯刚;;椎间盘纤维环组织工程研究进展[J];生物医学工程学杂志;2011年03期

2 徐涛涛;廖菲;金红婷;童培建;肖鲁伟;吴承亮;;椎间盘退变与细胞死亡的相关研究进展[J];中国骨伤;2015年07期

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 谢卯;线粒体在压力诱导椎间盘细胞凋亡和能量代谢障碍中的作用及其实验研究[D];华中科技大学;2011年

2 刘兰涛;人退变椎间盘软骨终板干细胞的鉴定及性质研究[D];第三军医大学;2012年

3 李俊;不同弹性模量静电纺丝聚氨酯纤维支架对兔纤维环干细胞分化的调控研究[D];苏州大学;2014年

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5 张春瑜;静水压联合IGF-1干预对山羊颞下颌关节盘细胞F-actin表达影响的实验研究[D];兰州大学;2013年

6 沈皆亮;SIRT1基因对退变椎间盘调控作用及其机制研究[D];重庆医科大学;2013年

7 董兴成;组织工程椎间盘纤维环支架构建的实验研究[D];第二军医大学;2013年

【二级参考文献】

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1 潘勇;周跃;李长青;郝勇;初同伟;张峡;王卫东;王建;张正丰;张年春;王敏;;组织工程椎间盘纤维环种子细胞的培养和鉴定[J];四川医学;2009年04期

2 张坤木;陈少清;宋红梅;何艳;廖军;洪钰;王诗忠;;大鼠椎间盘纤维环细胞的培养及鉴定[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年11期

3 刘杰;王建;周跃;;兔椎间盘髓核细胞体外生物学特性的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;2008年09期

【相似文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 卞正君;KLD-12多肽/TGF-β1诱导MSCs向髓核样细胞分化的实验研究[D];石河子大学;2015年

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本文编号：648540