重组MUC1-MBP融合蛋白配伍不同佐剂的抗肿瘤作用研究

发布时间：2017-10-10 04:07

  本文关键词：重组MUC1-MBP融合蛋白配伍不同佐剂的抗肿瘤作用研究

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【摘要】：Mucin1（MUC1）属于粘蛋白家族中的跨膜糖蛋白，，是肿瘤抗原典型的代表之一。MUC1由于在恶性肿瘤组织中与在正常组织中呈现显著差异，而成为肿瘤治疗的理想靶点。目前，关于MUC1的研究大部分处于Ⅰ-Ⅱ期临床试验阶段，少部分已经进入Ⅲ期临床。本课题组自2001年开始从事以MUC1为靶点的肿瘤疫苗研究，将MUC1基因与大肠杆菌麦芽糖结合蛋白（MBP）偶联，在大肠杆菌中成功表达该基因，制备出MUC1-MBP融合蛋白用于抗肿瘤疫苗的开发，在动物实验中取得了良好效果。但由于MUC1-MBP蛋白疫苗单独诱导的免疫应答并不强烈，因此，寻找与之配伍的合适佐剂，优化该疫苗的功能，以诱导出特别是以Th1型免疫应答为代表的安全、持久、足够有效的抗肿瘤免疫应答是非常必要的。在前期研究中，本研究组将卡介苗（BCG）作为佐剂同时注射，在动物实验中刺激免疫活性效果较好。但是BCG本身是一种活菌苗，活性不稳定性，另外还存在细胞毒性等弊端，如注射后导致了小鼠体重下降和局部组织坏死。因此，寻找一种更为安全有效的疫苗佐剂是我们目前要解决的问题。 本研究通过研究室常规方法成功制备出高纯度、内毒素合格的重组MUC1-MBP融合蛋白，将其分别联合佐剂CpG-ODN1585、CpG-ODN1826、CpG-ODN2006、BCG（卡介苗BCG）、胸腺肽α1、R848免疫小鼠，之后种植转染MUC1基因的B16黑色素瘤细胞，通过预防性抗肿瘤模型观察配伍不同佐剂后的抗肿瘤作用。研究发现，在本次筛选的6种佐剂中，联合佐剂CpG-ODN1826明显延长了小鼠生存期，对肿瘤生长的抑制效果最好。随后，在细胞水平和分子水平上分别检测免疫学活性，检测指标包括：MUC1特异性淋巴细胞增殖指数、MUC1特异细胞因子分泌、T淋巴细胞亚群分析等。结果发现，配伍其他的佐剂在诱导Th1型应答程度上各不相同，以配伍CpG-ODN1826后诱导的Th1免疫应答倾向最明显。 本研究提示CpG-ODN作为MUC1-MBP融合蛋白疫苗佐剂的开发价值，为进一步MUC1-MBP融合蛋白抗肿瘤疫苗的制剂研究奠定基础。
【关键词】：肿瘤疫苗 重组MUC1-MBP融合蛋白 佐剂 免疫活性 肿瘤模型
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-36
【目录】：

• 内容提要4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-15
• 英文缩略词15-16
• 第1章 文献回顾16-28
• 1.1 MUC1 的分子生物学17-18
• 1.1.1 MUC1 的表达17
• 1.1.2 MUC1 的结构17
• 1.1.3 MUC1 的分布17-18
• 1.1.4 MUC1 的生物学意义18
• 1.2 以 MUC1 为靶点的肿瘤疫苗18-21
• 1.2.1 在匹兹堡大学进行的 MUC1 疫苗试验（1993 年-2014 年）19-20
• 1.2.2 其他 MUC1 疫苗试验20-21
• 1.2.2.1 乳腺癌20
• 1.2.2.2 肺癌20
• 1.2.2.3 胰腺癌20-21
• 1.2.2.4 前列腺癌21
• 1.2.2.5 卵巢癌21
• 1.2.2.6 肾癌21
• 1.3 疫苗佐剂的分类及研究进展21-26
• 1.3.1 佐剂的简介21-22
• 1.3.2 佐剂的作用及作用机制22
• 1.3.3 理想佐剂的必备条件22
• 1.3.4 肿瘤疫苗佐剂22-26
• 1.4 本课题研究内容26-28
• 第2章 MUC1-MBP 融合蛋白的制备与鉴定28-39
• 2.1 实验材料28-29
• 2.1.1 菌株28
• 2.1.2 主要试剂28
• 2.1.3 主要仪器及耗材28-29
• 2.2 实验方法29-36
• 2.2.1 主要溶液配制29-31
• 2.2.2 MUC1-MBP 融合蛋白的制备31-36
• 2.3 实验结果36-39
• 2.3.1 MUC1-MBP 融合蛋白的制备与鉴定36-39
• 第3章 MUC1-MBP 融合蛋白配伍不同佐剂的抗肿瘤作用39-50
• 3.1 实验材料39-40
• 3.1.1 细胞株39
• 3.1.2 实验动物39
• 3.1.3 实验试剂39
• 3.1.4 抗原和佐剂39-40
• 3.2 实验方法40-44
• 3.2.1 主要溶液配制40-41
• 3.2.2 B16-MUC1 细胞的复苏41
• 3.2.3 B16-MUC1 细胞的传代培养41-42
• 3.2.4 B16-MUC1 细胞的鉴定42-43
• 3.2.5 预防性肿瘤模型的建立43-44
• 3.2.6 统计学分析44
• 3.3 实验结果44-50
• 3.3.1 稳定转染人全长 MUC1 的 B16-MUC1 的培养与鉴定44-45
• 3.3.2 预防性抗肿瘤模型的建立及效果分析45-50
• 3.3.2.1 预防性肿瘤模型的建立45-46
• 3.3.2.2 肿瘤抑制效果46-48
• 3.3.2.3 动物生存期48-50
• 第4章 MUC1-MBP 融合蛋白配伍不同佐剂的免疫学活性50-67
• 4.1 实验材料50-51
• 4.1.1 抗原和佐剂50
• 4.1.2 实验动物和细胞50
• 4.1.3 实验试剂50-51
• 4.1.4 实验仪器51
• 4.2 实验方法51-56
• 4.2.1 溶液配制51-52
• 4.2.2 动物的分组与免疫：52-53
• 4.2.3 MUC1-MBP 配伍不同佐剂免疫小鼠后免疫活性的检测53-56
• 4.2.4 统计学分析56
• 4.3 实验结果56-67
• 4.3.1 不同佐剂联合 MUC1-MBP 融合蛋白免疫后小鼠脾脏指数的变化56-57
• 4.3.2 有丝分裂原刺激小鼠脾脏淋巴细胞增殖情况57-58
• 4.3.3 MUC1 特异性刺激脾脏淋巴细胞增殖情况58-59
• 4.3.4 MUC1 特异性细胞分泌细胞因子的检测59-62
• 4.3.5 T 淋巴细胞亚群分析62-67
• 第5章 讨论67-73
• 第6章 结论73-74
• 参考文献74-81
• 作者简介及攻读硕士期间所取得的科研成果81-82
• 致谢82

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 方芳;宋献美;张庆勇;马吉春;窦蕊;陈文博;台桂香;;人MUC1和鼠Muc1蛋白疫苗抗肿瘤作用的比较[J];吉林大学学报(医学版);2010年01期

2 宋献美;方芳;马吉春;赵小霞;周静;台桂香;;利用小鼠皮下人乳腺癌移植瘤模型观察MUC1-MBP抗乳腺癌作用[J];免疫学杂志;2010年05期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 方芳;重组MUC1-MBP融合蛋白疫苗抗肿瘤作用机制研究[D];吉林大学;2010年

本文编号：1004218