索拉菲尼联合沙利度胺对肝癌细胞增殖及鸡胚尿囊膜血管生成的影响

发布时间：2017-10-11 09:07

  本文关键词：索拉菲尼联合沙利度胺对肝癌细胞增殖及鸡胚尿囊膜血管生成的影响

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【摘要】：背景:原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在我国是一种常见的恶性肿瘤疾病,由于我国乙肝、丙肝感染人数基数大,部分地区卫生条件较差,致使我国肝癌发病率约占全球的一半以上。因其发病具有隐匿性,约有90%的病例在发现时已经错过手术时机。另外统计显示,即便是肝癌患者及时行手术切除其5年复发率最高可达61.5%。因此,寻找一种针对手术无法切除和转移的晚期肝癌患者的治疗方案,是医疗工作者亟需解决的难题。恶性肿瘤生长迅速,其生长依赖于肿瘤新生血管血管提供的营养,靶向药物抗肝癌细胞增殖及肿瘤血管形成成为当今肝癌非手术治疗的研究热点。索拉菲尼(Sorafenib)是由德国拜耳公司研制的新型靶向治疗药物,已被美国FDA批准用于肝癌的临床系统治疗。索拉菲尼具有双重抗肿瘤作用:1、阻断Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路,直接地抑制肿瘤细胞的增殖;2、抑制与VEGF相应的酪氨酸激酶受体(VEGFR)的活性,通过阻断肿瘤血管生成,间接地抑制肿瘤细胞的生长。沙利度胺(Thalidomide)最初作为镇静药控制孕妇妊娠反应,因导致严重致畸事件而被停用,但近年来研究发现沙利度胺具有抗血管生成、抑制肿瘤生等特点,已有学者将其运用于实体瘤的治疗。在肿瘤的治疗中,单独用药往往效果有限,为了达到更好的治疗效果及更少的副作用,越来越多的研究集中在联合用药上,如索拉菲尼联合5-FU、阿霉素,沙利度胺联合紫杉醇对晚期肝癌的治疗等。但关于索拉菲尼、沙利度胺联合应用于肝癌的治疗研究却鲜见于报道。目的:本实验通过观察索拉菲尼、沙利度胺单独用药、联合用药对人肝癌细胞组体外生长及鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的影响,来证实二者联合应用在抗肿瘤生长及抗血管生成方面是否更具有优势。为进一步临床试验及治疗提供理论依据。方法:1、联合用药对肝癌细胞增殖的影响:以人肝癌细胞组BEL7402为实验对象,将索拉菲尼试剂制作成不同浓度工作液,分别给药后通过MTT法测得索拉菲尼抑制率,并求得其IC50值,同样方法测得沙利度胺抑制率及其IC50值。然后取对数生长期的BEL7402人肝癌细胞调制成0.2×105个/ml,组铺设96孔板,每孔200ml,共分为4组,在沙利度胺和索拉菲尼各自IC50值以下选取适宜浓度分别组成:空白对照组,索拉非尼组,沙利度胺组,联合用药组,每组设5个复孔,共铺5块96孔板。孵化24小时后分别给药后放入孵化箱孵育,每过12小时随机取出1块96孔板,并进行MTT实验,运用酶标仪测定每组的平均A值,进而计算出每组细胞生长抑制率,最后绘制出生长曲线并评价联合用药的效果。2、联合用药对鸡胚尿囊膜血管生成的影响:选取7日龄活胚蛋100枚,随机分为4组(空白对照组,索拉非尼组,沙利度胺组,联合用药组),每组25个。制作假气室暴露CAM膜,分组加药。加药后用无菌封口膜封窗,继续孵育2天。孵育完毕后,每组选取存活的CAM模型,打开封口膜,加入固定液,室温下固定并制作CAM标本,阴干后显微镜下观察并拍照,通过图象处理软件计算血管覆盖率。经统计学处理评价联合用药是否具有优越性。结果:1、索拉非尼、沙利度胺对BEL7402细胞的半数抑制浓度(IC50):1.5、3、6、12、24μΜ/L的索拉非尼作用于BEL7402细胞48小时后的抑制率分别为12.5%、22.2%、34.9%、49.2%、65.1%,6.25、12.5、25、50、100μg/ml的沙利度胺作用于肝癌细胞系BEL7402 48小时后的抑制率分别为18.2%、29.1%、38.2%、58.2%、69.1%。索拉非尼、沙利度胺对BEL7402细胞的半数抑制浓度(IC50值)分别为11.9μΜ/L、36.9μg/ml。2、联合用药对BEL7402细胞抑制作用:沙利度胺(25μg/ml)与索拉菲尼(3μΜ/L)联合用药作用于BEL7402细胞时,其效果相对于单药组差别具有统计学意义(p0.05),并且联合用药组效果大于于单药组药效代数和。3、联合用药对鸡胚尿囊膜血管生成的影响:镜下观察显示:空白对照组血管呈叶脉样生长,粗壮密集,分支较多。加药组血管数明显少于对照组,并且血管较细,分支少,部分血管萎缩、断裂,其中以联合用药组最为明显。经图像分析软件计算:沙利度胺和索拉菲尼组相对于空白对照组血管覆盖率有明显差异[(30.2±2.9)vs(38.3±2.7),q=17.05,p0.05;(26.5±2.1)vs(38.3±2.7),q=24.59,p0.05],联合用药组与沙利度胺、索拉菲尼组对比,差异有统计学意义[(12.6%±1.5%)vs(30.2%±2.9%),q=36.68,p0.05;(12.6%±1.5%)vs(26.5%±2.1%),q=28.67,p0.05]。结论:1、索拉菲尼、沙利度胺对BEL7402细胞均有明显的增殖抑制作用,并具有明显的量效关系,而二者联合应用对BEL7402细胞的增殖抑制作用更加明显,呈协同作用。2、索拉菲尼、沙利度胺均有良好的抗血管生成效果,而联合用药可使抗血管效果更加显著。
【关键词】：索拉菲尼 沙利度胺 鸡胚尿囊膜 肝癌 抗血管生成
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 内容摘要4-7
• Abstract7-14
• 第1章 绪论14-18
• 第2章 实验材料和方法18-22
• 2.1 实验材料18-19
• 2.2 实验方法19-22
• 2.2.1 不同用药方式对BEL7402细胞增殖抑制作用19-21
• 2.2.2 不同用药方式对鸡胚尿囊膜血管生成的影响21
• 2.2.3 统计学处理21-22
• 第3章 实验结果22-26
• 第4章 讨论26-29
• 第5章 结论29-30
• 参考文献30-35
• 作者简介及发表论文35-36
• 致谢36

【参考文献】

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本文编号：1011648