Eps8在乳腺癌细胞增殖与迁移中的作用

发布时间：2017-10-11 21:18

  本文关键词：Eps8在乳腺癌细胞增殖与迁移中的作用

  更多相关文章： EGF受体底物8 乳腺癌 细胞增殖和迁移 胞外信号通路调节蛋白激酶 F-actin 上皮-间质转导

【摘要】：表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)参与多种类型肿瘤的发生发展,我们的免疫组化结果表明与癌旁正常组织相比,60%以上的人乳腺癌组织中Eps8高表达。而且,Eps8在高侵袭的乳腺癌细胞株MDA-MB-231中高表达;而低侵袭的细胞系MCF7和MDA-MB-468中表达水平较低。然后我们通过G418筛选出稳定过表达Eps8的MCF-7细胞系,利用MTT法、细胞存活率和液体克隆形成等实验方法发现Eps8的过表达能促进乳腺癌细胞MCF7的生长,提高细胞存活率。反之,用Eps8 shRNA慢病毒感染MDA-MB-231细胞后细胞生长和增殖受到明显抑制:流式凋亡检测结果表明活细胞比例下降,早期凋亡和晚期凋亡细胞比例上升;周期分析显示细胞被阻滞在G1/S期;裸鼠成瘤实验证明细胞在体内的增殖也受到明显抑制。同时通过伤口愈合分析法、免疫荧光定位及MTT分析发现,敲低Eps8的表达使得乳腺癌细胞的迁移能力下降,EGF诱导的丝状伪足的数目和大小减少,同时对顺铂的敏感程度增加。而且,敲低Eps8的表达能减少磷酸化的胞外信号调节蛋白激酶(p ERK)和MMP9的表达量,但能增加肿瘤抑制因子p53的表达水平。此外,敲低Eps8的表达抑制上皮-间质转化,E-cadherin表达量明显上升,而N-cadherin和vimentin的表达受到抑制。这些结果表明,在乳腺癌中过表达Eps8可调节ERK信号通路、MMP9、p53和上皮-间质转导影响乳腺癌细胞的生长、迁移和侵袭。因此,Eps8是一个潜在的新的乳腺癌治疗靶点。
【关键词】：EGF受体底物8 乳腺癌 细胞增殖和迁移 胞外信号通路调节蛋白激酶 F-actin 上皮-间质转导
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文缩写表8-11
• 前言11-20
• 1.乳腺癌简介11-15
• 1.1 乳腺癌的分类及生物学特征11-12
• 1.2 乳腺癌的发生机制12-15
• 1.2.1 人表皮生长因子受体 2（HER-2/neu）12-13
• 1.2.2 肿瘤抑制因子TP5313-14
• 1.2.3 nm2314-15
• 1.2.4 Cyclin D115
• 2. Eps8基因简介15-20
• 2.1 Eps8蛋白的结构15-16
• 2.2 Eps8的生理功能16-20
• 第一部分 材料和方法20-28
• 1.材料20
• 2.主要仪器20-21
• 3. 实验方法21-28
• 3.1 免疫组化21-22
• 3.2 细胞培养22-24
• 3.2.1 细胞解冻22-23
• 3.2.2 细胞传代23
• 3.2.3 细胞冻存23-24
• 3.3 建立稳定过表达GFP和GFP-Eps8的MCF7细胞系24
• 3.3.1 细胞转染24
• 3.3.2 抗生素筛选24
• 3.4 Eps8 siRNA慢病毒的制备与细胞感染24-25
• 3.5 细胞增殖测定25-26
• 3.5.1 细胞活力分析25
• 3.5.2 细胞计数法25
• 3.5.3 液体克隆实验25-26
• 3.6 细胞周期检测26
• 3.7 细胞凋亡检测26
• 3.8 裸鼠成瘤实验26
• 3.9 细胞划痕实验26-27
• 3.10 免疫荧光实验27
• 3.11 Western blot实验27
• 3.12 统计学分析27-28
• 第二部分 结果与分析28-38
• 1.Eps8在乳腺癌组织和高侵袭性细胞株中高表达28-30
• 2.Eps8的过量表达促进乳腺癌细胞MCF7的增殖30-32
• 3. Eps8的敲低抑制MDA-MB-231细胞在体内、体外的增殖和存活32-34
• 4. Eps8的敲低抑制乳腺癌细胞的侵袭能力，减少EGF诱导的丝状伪足大小和数量，，并增强乳腺癌细胞对顺铂的敏感性34-36
• 5. Eps8影响ERK信号通路以及MMP9、p53和EMT蛋白的表达36-38
• 讨论38-41
• 参考文献41-47
• 附录47-48
• 致谢48-49

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本文编号：1014793