ARNT2在人胃癌中的表达及对细胞增殖的影响

发布时间：2017-10-14 09:15

  本文关键词：ARNT2在人胃癌中的表达及对细胞增殖的影响

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【摘要】：胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,虽然其发病率在某些发达国家有所下降,但在我国恶性肿瘤发病率及死亡率中依然位于前三。胃癌的发生及发展过程中常存在转录因子的异常改变,而转录因子对基因的表达调控在肿瘤发生发展过程中发挥十分重要的作用,通过对这一现象的深入研究可从基因水平上提高胃癌的诊断及治疗。芳香烃受体核易位蛋白2(aryl hydrocarbon-receptor nuclear translocator, ARNT2)是一种细胞核内重要的转录因子,属于bHLH转录因子超家族中新发现的PAS(Per-ARNT-Sim)亚家族,主要在肾脏、神经系统中表达。以往对ARNT2的研究多集中于其在胚胎发育的血管形成以及神经发育过程中的作用,而近年来的研究表明,ARNT2也参与了肿瘤的发生与发展。乳腺癌中ARNT2高表达是乳腺癌预后的保护性因素。ARNT2在非小细胞肺癌中的表达水平明显低于癌旁正常肺粘膜组织,而其在肝细胞癌中的表达情况却与之相反,由此可见,ARNT2在肿瘤中的表达存在组织特异性,因此有必要研究其在胃癌中的具体表达情况及在胃癌发生发展中发挥的具体作用。目的1.检测ARNT2在人正常胃粘膜上皮细胞及胃癌细胞中的表达,并比较两者差异；检测ARNT2在人胃癌组织及癌旁正常胃粘膜组织中的表达,比较两者差异并分析ARNT2在胃癌中的表达水平与临床病理参数及预后之间的关系,探讨其在临床中的应用价值。2.检测ARNT2过表达后胃癌细胞增殖能力及抗凋亡分子Survivin及bcl-2的表达的变化,明确ARNT2对胃癌细胞增殖能力的影响并探讨其具体作用机制。方法1.运用qRT-PCR和Western blot检测ARNT2在正常胃粘膜细胞株及多种胃癌细胞株中mRNA及蛋白的表达水平。2.通过免疫组织化学染色法检测89例胃癌组织及相应癌旁正常胃粘膜组织中ARNT2的表达情况。3.构建ARNT2过表达质粒,分别转染胃癌细胞株BGC-823、MGC-803,荧光显微镜检测转染效率,qRT-PCR和Western blot检测ARNT2过表达情况。4.采用CCK-8实验观察ARNT2过表达对胃癌细胞增殖能力的影响。5.运用Western blot检测ARNT2过表达后抗凋亡分子Survivin及bcl-2的表达变化。结果1. qRT-PCR和Western blot检测结果显示,4种不同胃癌细胞中ARNT2的表达水平均明显低于正常胃粘膜上皮细胞,且差异均有统计学意义(P均0.05)2.免疫组织化学染色法检测结果显示,ARNT2在胃癌组织及相应癌旁正常胃粘膜组织中的阳性表达率分别为44.94%、79.78%,差异显著且有统计学意义(P0.05)。ARNT2在胃癌中的表达水平与患者的性别、肿瘤的类型、分化程度及浸润深度相关(P0.05),与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期无关(P0.05),并且ARNT2高表达患者的总生存期远高于低表达患者,且差异具有统计学意义(P0.05)3.荧光显微镜检测结果显示,胃癌细胞株BGC-823、MGC-803的ARNT2的空载及过表达质粒转染效率均达70%以上；qRT-PCR和Western blot检测结果显示ARNT2过表达质粒转染两株胃癌细胞后可明显提高ARNT2的表达水平(P0.05)4.CCK-8实验结果显示,ARNT2过表达的胃癌细胞增殖能力低于转染空载体组(P0.05),表明ARNT2可抑制胃癌细胞的增殖。5. Western blot检测结果显示,ARNT2过表达的胃癌细胞其抗凋亡分子Survivin及bcl-2的表达水平均下降。结论不同胃癌细胞株中ARNT2 mRNA及蛋白的表达水平均低于正常胃粘膜上皮细胞株,并且ARNT2在胃癌组织中的表达水平也显著低于癌旁正常胃粘膜组织,两者结果一致;肿瘤分化程度越高,浸润深度越浅,生存期越长,ARNT2表达水平越高；ARNT2过表达的胃癌细胞增殖能力明显减弱,且抗凋亡分子Survivin及bcl-2的表达水平均明显下降,以上实验结果均提示ARNT2可能作为抑癌基因影响肿瘤的发生发展。
【关键词】：芳香烃受体核易位蛋白2 胃癌 转录因子 细胞增殖
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符号说明13-14
• 前言14-16
• 第一部分 ARNT2在人胃癌中的表达及临床意义16-28
• 材料与方法16-25
• 实验结果25-26
• 讨论26-28
• 第二部分 ARNT2过表达对胃癌细胞增殖的影响28-42
• 材料与方法28-38
• 实验结果38-40
• 讨论40-42
• 结论42-43
• 附：图表43-51
• 参考文献51-55
• 致谢55-56
• 攻读学位期间发表的文章及参与的课题56-57
• 学位论文评阅及答辩情况表57

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本文编号：1030228