MicroRNA-21和PTEN在急性髓系白血病中的表达及临床意义

发布时间：2017-10-15 04:38

  本文关键词：MicroRNA-21和PTEN在急性髓系白血病中的表达及临床意义

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【摘要】：目的:检测急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞中Micro RNA-21(mi R-21)及抑癌基因PTEN m RNA的表达水平,分析其在AML患者不同病程中的表达特点,并研究mi R-21及PTEN m RNA在AML患者中表达水平的相关性及各自与AML的不同亚型及相关临床特征间的关系,进而探讨其在AML中的临床意义。方法:1、共收集AML患者骨髓标本80例,其中初治患者43例(按FAB分型,M1 5例,M2 16例,M3 7例,M4 5例,M5 7例,M6 3例),难治复发患者13例,完全缓解期患者24例。对照组为非恶性血液病患者骨髓20例。2、分离骨髓单个核细胞并提取总RNA,逆转录成c DNA后,采用实时荧光定量PCR方法检测mi R-21和PTEN m RNA及相关内参的表达得其CT值,用公式2-△Ct计算目的基因mi R-21和PTEN m RNA的相对表达量。3、采用SPSS17.0统计软件分析,计量资料呈非正态分布,用四分位数描述,在各组间的差异分析采用Mann-Whitney U检验,相关性分析采用Spearman秩相关法。检验水准取ɑ=0.05,P0.05为差异有统计学意检验意义。结果:1、mi R-21在AML中的表达水平上调,初治组为1.048(0.392~9.24),完全缓解组为0.77(0.12~2.19),难治复发组为1.996(0.69~6.902),均高于对照组的表达水平0.487(0.04~2.729),且有统计学意义(P0.05);完全缓解组mi R-21的表达量较初治组、难治复发组有所下降(P0.05);难治复发组mi R-21的表达量高于初治组,但差异无统计学意义(P0.05)。2、mi R-21在初治AML各亚型中的表达水平不同:M1为0.6(0.481~1.389),M2为0.635(0.392~3.863),M3为3.399(0.983~9.339),M4为1.087(0.603~4.032),M5为1.226(0.924~8.987);M3、M5型mi R-21表达水平高于M1、M2型(P0.05);其他各亚型间的差异比较无统计学意义(P0.05)。3、初治AML患者mi R-21表达水平与骨髓原始细胞比例呈低度正相关,且有统计学意义(r=0.361,P0.05),未发现与患者年龄、性别、外周血白细胞数、血小板计数、血红蛋白含量以及染色体预后分组存在相关性(P0.05)。4、PTEN m RNA在AML中的表达是下调的:初治组为0.561(0.003~0.9),完全缓解组为0.716(0.122~0.912),难治复发组为0.401(0.012~0.901),对照组为0.912(0.002~1.108);初治组、完全缓解组及难治复发组的表达水平均低于对照组,差异有统计意义(P0.05);初治组PTEN m RNA的表达量低于缓解组且有统计意义(P0.05);难治复发组PTEN m RNA的表达量低于缓解组,但差异无统计学意义(P0.05);其余各组间差异均无统计学意义(P0.05)。5、PTEN m RNA在AML初治组各FAB亚型中的表达水平分别为:M1为0.539(0.120~0.801),M2为0.623(0.003~0.9),M3为0.421(0.120~0.780),M4为0.742(0.237~0.821),M5为0.429(0.002~0.760);各亚型间表达不同但无统计学意义(P0.05)。6、初治AML患者PTEN m RNA表达水平与患者年龄、性别、骨髓原始细胞比例、外周血白细胞数、血小板计数、血红蛋白含量及染色体核型均未发现存在相关性(P0.05)。7、相关性分析结果未发现AML患者骨髓单个核细胞中mi R-21及PTEN m RNA表达水平存在相关性(P0.05)。结论:1、mi R-21在AML患者骨髓中普遍过表达,其表达水平与疾病状态、FAB分型有关。2、在AML中,mi R-21的表达水平与患者骨髓原始幼稚细胞比例呈低度正相关。3、PTEN m RNA在AML中普遍低表达,且表达水平与疾病状态有关,而与FAB分型、临床特征指标之间未发现相关性。4、mi R-21和PTEN m RNA的表达水平与AML的染色体预后之间均未发现相关性。5、AML患者中mi R-21与PTEN m RNA的表达水平之间未发现存在相关性。
【关键词】：急性髓系白血病 miR-21 PTEN基因 qRT-PCR
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料与方法13-23
• 2.1 临床资料及治疗方案13-14
• 2.2 主要仪器14
• 2.3 主要试剂14-15
• 2.4 主要试剂配制15-16
• 2.4.1 磷酸缓冲液（PBS）15
• 2.4.2 0.1%DEPC水15
• 2.4.3 75%乙醇的配制15
• 2.4.4 5×TAE缓冲液的配制15
• 2.4.5 10×红细胞裂解液配制：15-16
• 2.5 实验方法16-22
• 2.5.1 标本收集16
• 2.5.2 骨髓单个核细胞分离16
• 2.5.3 总RNA的提取16-17
• 2.5.4 RNA质量检测17-18
• 2.5.5 总RNA逆转录18-20
• 2.5.6 荧光定量PCR引物20
• 2.5.7 实时荧光定量PCR反应（qRT-PCR）20-22
• 2.6 统计学分析22-23
• 第3章 结果23-31
• 3.1 总RNA质量检测23
• 3.2 荧光定量PCR产物分析23-24
• 3.3 miR-21在AML不同疾病状态及对照组中的表达24-25
• 3.4 miR-21在初治AML不同FAB亚型中的表达25-26
• 3.5 PTEN mRNA在AML各组及各亚型间的表达26-27
• 3.6 初治患者miR-21、PTEN mRNA表达与特征性指标的相关性27-29
• 3.7 初治AML患者miR-21、PTEN mRNA的表达与年龄、性别及染色体核型的相关性29-30
• 3.8 miR-21与PTEN mRNA表达水平的相关性30-31
• 第4章 讨论31-39
• 4.1 microRNA简介31-32
• 4.2 miRNA-21作为癌基因的研究32-33
• 4.3 miRNA-21在AML中的表达及与临床特征指标的相关性分析33-35
• 4.4 PTEN mRNA在AML中的表达及与临床特征指标的相关性分析35-37
• 4.5 miR-21与PTEN mRNA在AML中的表达的相关性分析37-39
• 第5章 结论与展望39-40
• 5.1 结论39
• 5.2 展望39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-46
• 攻读学位期间的研究成果46-47
• 综述47-54
• 参考文献52-54

【参考文献】

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本文编号：1035167